人结肠癌细胞CACO-2红色荧光标记BALB／cA-nu小鼠模型

结肠腺癌是结肠腺上皮来源的常见消化道恶性肿瘤，属于结肠癌多种病理类型中的一种。

结肠腺癌起病隐匿，早期仅见粪便隐血阳性，逐步为血便、痢疾样脓血便，里急后重。病人常有不同程度的腹痛，常有糜烂、坏死和继发性感染，如发生在右侧则会产生右腹部钝痛，有时出现餐后腹痛。左侧结肠癌常并发肠梗阻，时有腹部绞痛，伴有腹胀、肠鸣音亢进等。腹部肿块多见于右腹部，是右侧结肠癌的表现之一，提示已到中晚期，肿块表面可有结节感 ，一般可以推动，但到肿瘤晚期时则固定，合并感染时可有压痛。结肠癌的患者可出现进行性贫血，低热，进行性消瘦，恶液质，肝肿大、浮肿、结肠腺癌黄疸和腹水等。

BALB／cA-nu小鼠，胸腺缺失，为第11对染色体隐性遗传，T细胞免疫缺陷，B细胞正常，具有较高的NK细胞活力，无接触GFP敏感性，无移植排斥反应。

制作稳定高表达DsRed的细胞，在荧光显微镜下呈强荧光，并且荧光均匀分布于整个细胞内，传代数次后仍能稳定高水平表达DsRed（图1）。细胞形态和未转染细胞无明显区别。

图1红色荧光标记的CACO-2肿瘤细胞

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄6周，体重16—20 g。 BALB／cA-nu裸小鼠在实验室无特定病原体饲养间饲养。收集处于生长对数期的CACO-2-DsRed肿瘤细胞，稀释至5×106cells／mL。取200μL细胞悬液进行皮下注射接种。

分别在接种的7、14、21、28和35 d观察肿瘤的生长情况。在接种的第7天就可以观察到接种部位肿瘤发光，通过肿瘤组织发出的荧光的光子数可以确定肿瘤的大小，随着观察天数的增加，肿瘤的体积和发光强度增加 (图1)。28天后肿瘤中心区域荧光降低，显示肿瘤中心出现坏死。以肿瘤细胞发射的光子数对小鼠荷瘤时间作图，得到红色荧光蛋白标记CACO-2的肿瘤细胞在裸鼠体内的生长曲线(图2)。

图1皮下接种CACO2-DsRed肿瘤生长影像分析

图2荧光标记肿瘤的生长曲线

该小动物模型饲养在清洁级动物中，微生物处于监控状态，动物房有相应的保护措施，小鼠不会出现逃逸，不会对外界环境造成影响。