肌苷致急性高尿酸血症小鼠模型

高尿酸血症是由各种因素引起的尿酸产生过多、或肾脏排出尿酸减少、或两者兼有，致使血液中尿酸盐超过正常水平（6 毫克/100 毫升）的病理状态。高尿酸血症是痛风最重要的生化基础，并且与心血管疾病、免疫系统紊乱等密切相关，严重危害人类健康。目前临床上用于治疗高尿酸血症的药物以抑制尿酸生成和促进尿酸排泄为主。随着分子生物技术的快速发展和人们对高尿酸血症发病机制和遗传学认识的日益加深，新的治疗靶点不断被发现，新型治疗药物也相继问世。寻找更加合理、科学的药效学评价动物模型迫在眉睫。

尿酸是人体嘌呤代谢的终产物,主要有肝脏代谢产生,肾脏排泄出体外。高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)是血液中由于肝脏代谢产生尿酸过多或肾脏排泄尿酸减少,或者两者兼有的原因产生血液中尿酸水平增高,甚至高于血尿酸产生结晶的饱和浓度(7.0mg/dl,相当于416.5umol/L)是的病理状态。近年来,随着人民生活水平的提高,饮食结构和生活习惯的改变,高尿酸血症的患病率逐年增高,流行病学研究资料表明高尿酸血症和原发性痛风的发病呈上升趋势,在中国,已经有1.2亿的HUA人群,大约占总人口的10%,中老年及绝经后的妇女为高发人群,近年来发病年龄也呈年轻化的趋势。高尿酸血症与肥胖、高血压、高脂血症、冠状动脉粥样硬化性心脏病、胰岛素抵抗的发生密切相关,已成为识别代谢综合征的早期标志,这使人们对高尿酸血症产生了更多关注，并重新审视一些疾病的危险因素和防治策略,治疗和控制高尿酸血症己成为代谢性疾病治疗的重要组成部分。动物模型是研究疾病发病机理,寻找新型治疗药物的重要工具。目前国内外高尿酸血症动物模型复制方法多样,主要造模方法有补充尿酸前体物质次黄嘌呤、补充外源性尿酸,使用氧嗪酸钾(potassiumoxonate)抑制尿酸酶活性、腺嘌呤抑制尿酸排泄。其中应用较为成熟稳定且常用的造模方法通过氧嗪酸抑制尿酸酶活性导致血清尿酸值升高。但现有的动物模型在稳定性和代谢途径方面均存在一-定的不足,因而限制了治疗高尿酸d血u症药物的发展及高尿酸血症致病机制研究探索建立更合乎人类发病机制、与人体尿酸代谢异常相似的动物模型仍是目前高尿酸模型研究中值得不断探索和努力的课题。

SPF级ICR小鼠100只,雌雄各半,体重22-25g。

1. 诱导剂准备

肌苷(Inosine)：Inosine,Sigma公司,批号:Lot#SLBP5740V,生理盐水溶解。给药途径:腹腔注射。

尿酸(UA)测定试剂盒,南京建成生物工程研究所产品,批号:20170502

2. 实验动物

SPF级ICR小鼠100只,雌雄各半,体重22-25g。

3. 给药

选取22--25g小鼠40只,雌雄各半,随机分为5组,每组8只,按下列剂量腹腔注射肌苷,剂量分别为:100mg/kg、400mg/kg.500mg/kg.600mg/kg,对照组为等体积的生理盐水。用药后于0h、0.5h、1h、2h、4h.8h尾静脉采血0.5ml,分离血清。

（1） 尿酸水平检测

结果显示:小鼠100mg/kg、400mg/kg、500mg/kg.600mg/kg剂量组与对照组对比尿酸值在0.5h均有升高。小鼠100mg/kg剂量组与对照组对比尿酸值有升高,但升幅不大，400mg/kg、500mg/kg剂量组在0.5h血尿酸浓度大于尿酸在血中的结晶浓度416.5umol/L,Ih开始下降,4h血清尿酸值恢复致平均水平,0.5h血尿酸浓度与对照组对比尿酸值差异有统计学意义,P<0.01;600mg/kg剂量组与正常组对比尿酸值在0.5h,Ih有升高,但升幅未能达到不到尿酸在血中的结晶浓度(417umo1/L),2h开始下降。综上所述,致使小鼠高尿酸血症肌苷的最佳剂量为400mg/kg和500mg/kg,其中400mg/kg剂量就可行成稳定的急性高尿酸血症。结果为表1,图1。表型信息

模型动物饲养在武汉大学人民医院动物房SPF级动物实验室，实验动物使用许可证SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特点

门采用专用净化密闭门并配备观察窗。单向走道呈顺时针走向设计。屏障系统内共有大鼠饲养室1间，小鼠饲养室3间，隔离观察室1间，实验准备室1间，洁物存放室1间，清洗消毒室1间。此外，屏障系统外配有监控室、机房和配电室等。

（2）设计参数

室内温度：20～26°C；日温差：≤4°C；相对湿度：40%～70%；换气次数：15～20次/h；气流速度：≤0．2m/s；压强梯度：20～50Pa；空气洁净度：7级；菌落数：≤3个/皿；氨浓度：≤14mg/m3；噪声：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；动物照度：15～20lx；昼夜明暗交替时间：12/12h。

（3）通风和空调系统

动物实验室采用全新风中央空调通风系统。空气经过初、中、三级过滤器后进入实验室内环境。

（4）照明系统

一更、淋浴、二更、气闸、清洁走道、洁物存放处、污物走道、缓冲间和清洗消毒间、动物饲养室、实验准备间、隔离观察室和功能实验室等安装有手动和自动开关，根据实际需要，调节控制室内照明灯。未启用房间、清洁走道、洁物存放处、污物走道等在每日中午12点和晚上8点开启紫外线灯照射1h。

（5）通讯系统

因为SPF级动物实验室的环境和设施具有特殊要求，人员进入后不能随意出入，而室内外的联系又十分重要，故室内各房间均安装内部电话机，按照房间顺序编排电话号码，各室内电话可相互连通，并均与监控室总机保持联系，保证实验室内外信息的及时沟通。

（6）监控系统

对SPF级动物实验室的出入口、走道、实验动物饲养室、功能操作室等重要位置均安装了可作270°旋转的摄像机，能够及时了解设施的运行状态；也能有效督促实验人员执行科学的操作规程，避免人为因素造成室内环境和设施的污染；并对整个实验期间的动物状态和反应进行观察，减少对动物的滋扰。

（7）供水系统

SPF级实验动物饮用水以纯净水为宜。本实验室采用管道供水，将处理后的纯净水用塑胶管道输送到屏障系统内实验准备室，设置接水槽，为实验动物供应灭菌的饮用水和屏障系统内用水。要经常更换和清洗输水管道，清洗笼具的用水添加适当比例的84消毒液。

（8）供电系统、警报系统和消防设施

SPF级动物实验室要求全天候不间断供风和供电，如果出现故障，不能及时发现和处理，就可能导致环境设施的污染、动物感染或死亡，造成严重后果。因此应对SPF级动物实验室使用独立稳定的供电系统，并配备有应急电源。在中央空调机房控制室安装风机故障警报系统，以便及时检修和维护，保证设施的安全运行。

（9）消毒灭菌设备

为防止外界物品进入SPF级动物实验室时所携带的细菌污染室内环境和造成动物交叉感染，按照不同物品的特性，进行紫外线照射消毒、渡槽消毒液消毒或专用的机动门真空灭菌器消毒。

（10）动物饲养笼具

饲养大、小鼠的笼具聚碳酸脂材料的塑胶笼具，具有高透明、耐高压、耐高温、耐酸碱等特点。通用的不锈钢笼具长、宽、高分别为40、30、20cm，适用于单笼饲养有特殊要求的实验动物，配有底盘和食槽，确保实验动物有充足的采食和活动空间，同时也保证室内环境的清洁。

（11）垫料的选择和使用

在使用塑胶垫料时，垫料是大小鼠直接接触的铺垫物，起到吸湿、保暖和造窝的作用。垫料的好坏直接影响到大小鼠术后的恢复、生长发育和繁殖性能。目前，所使用的垫料主要有玉米秸垫料、刨花垫料。

（12）饲料配制

大小鼠的生产型饲料和维持型饲料必须严格按照国家标准，进行科学配制生产。每半年检测一次饲料的微生物指标和有效营养成分指标，保证饲料的质量。

该模型通过长期观察普通狼疮小鼠模型，待其到40周龄时，检测其dsDNA等，结合皮肤症状变化，来确定慢性狼疮皮肤病模型的建立。目前国际上尚欠缺类似模型，为研究狼疮皮肤病发病机制提供了工具。