猕猴局部脑缺血模型

脑血管疾病严重危害人类健康, 是目前人类发病率最高的疾病之一 ,并常导致残疾, 给社会和家庭带来沉重负担。在脑血管疾病中以缺血性疾病的 发病率占据首位 。血管缺血性损伤是由于各种原因诱发脑血管栓塞引起脑组织缺血、缺氧 ,进一步诱发脑神经细胞变性、坏死 ,最终导致神经功能障碍 、丧失的一类疾病。在临床上 , 引起缺血性损害的原因多种多样。由于缺血是一种供血异常, 血管因素在其中发挥重要作用。

猕猴在进化上与人类高度同源，种属差异小，在组织结构和生理特征上与人类极为相似，这一突出特点奠定了恒河猴动物在药物生产和评价、功能和进化比较基因组学研究、人类重大疾病模型复制和应用、再生医学等研究领域中不可或缺的优势地位

麻醉后的动物采用俯卧位固定在立体定位仪上 ,颅顶区备皮 ,常规消毒手术区皮肤,沿矢状面在颅顶正中切开长约 4 ～ 5 cm 的切口 ,逐层分离皮下组织、帽装肌腱 、肌肉、骨膜 , 用扩张器充分暴露手术视野。使用便携式颅钻在顶 骨裂处进行颅骨钻孔 , 以钻透颅骨 , 达硬脑膜为止 (有落空感)。钻好的孔为椭圆形 ,大小为 3.0 cm × 1.5 cm , 其长轴与颅骨正中线垂直。将冷光源发生 器的发光口固定与颅顶开口处。周围用浸透生理盐水的无菌纱布覆盖伤口 。用铝箔纸遮盖动物眼睛, 避免光化学反应对动物视网膜的损害。静脉注射玫 瑰红 B35 mg kg ,从注射完毕开始计时 , 5 min 后打开 光源 ,电子光强选择 6 ,机械光强选择, 照射 10 min 。 第一次注射后 10 min 第二次注射玫瑰红 B , 浓度与 第一次相同。照射完毕后,向颞侧移动光源发光口, 在第二点照射 10 min 。缝合骨膜 、皮肤。肌肉注射青霉素 40 万 单位预防感染 。

1.行为学表型:动物会出现肢体运动失调、震颤等一系列行为学改变。在术后 2 h , 1 、2 、3 、7 、14 、21 、28 、35 d 内,使用经过修改 、细化的 Kito 灵长类动物神经功能损害评分表对模型动物进行意识、骨骼肌肉协调、感觉系统 、意识系统的行为学相关测试进行评价.

2.影像学表型 : 动物在进行影像学检查时会出现明显的影像学改变，在造模后 24 h 进行 PET 扫描，对病灶大小进行观察记录。

3.组织病理学表型:动物造模部位会出现梗死等病理学变化。在造模后2 、5 周后分别处 死动物 2 只动物 ,经生理盐水及 10 %中性福尔马林 心脏灌注后, 取脑组织进行固定、切片 , 通过 HE 染 色、特殊染色等染色方法观察梗死灶周围的病理学改变。

A 造模12小时梗死灶面积3.6*11.6mm；B造模后12小时，脑组织内毛细血管扩张充血，脑组织水肿； C造模后12小时，大脑皮质局部水肿，神经细胞变性坏死，大量吞噬棕黄色色素的泡沫细胞浸润； D造模后35天梗死灶面积1.2*6mm ；E造模35天后脑组织坏死，泡沫细胞浸润；F造模35天后脑组织坏死区毛细血管内黄色结晶，泡沫细胞浸润。

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。