二氢嘧啶脱氢酶检测

引言

二氢嘧啶脱氢酶（Dihydropyrimidine Dehydrogenase, DPD）是嘧啶代谢途径中的关键酶，负责催化5-氟尿嘧啶（5-FU）等化疗药物的分解代谢。DPD活性缺失或降低会导致药物在体内蓄积，引发严重毒性反应甚至危及生命。近年来，随着精准医疗的发展，DPD检测已成为肿瘤化疗前的重要筛查项目。本文将从检测范围、项目、方法及仪器等方面，系统阐述DPD检测的临床意义与技术细节。

检测范围

DPD检测主要应用于以下临床场景：

• 接受5-FU或卡培他滨等氟尿嘧啶类药物治疗的肿瘤患者
• 既往有化疗药物严重不良反应史的患者
• 存在DPD基因多态性风险人群的遗传筛查
• 化疗后出现骨髓抑制或神经毒性的病因诊断
• 特殊人群（如肝肾功能不全患者）的用药剂量调整

检测项目

• 酶活性测定：通过外周血单核细胞检测DPD催化尿嘧啶转化为二氢尿嘧啶的速率
• 基因多态性分析：检测DPYD基因的常见突变位点（如*2A、*13等）
• 代谢产物浓度检测：测定尿液中二氢尿嘧啶/尿嘧啶比值（UH2/U）
• 血药浓度监测：动态跟踪5-FU及其代谢物的血浆浓度

检测方法

1. 酶活性测定法

采用放射性同位素标记法或色谱法检测：将分离的外周血单核细胞与底物（[14C]胸腺嘧啶）孵育，通过液相色谱（HPLC）定量测定反应产物。该方法灵敏度达0.5 nmol/(h·mg蛋白)，变异系数<15%。

2. 基因检测技术

• 实时荧光定量PCR：检测DPYD基因热点突变
• Sanger测序：对DPYD基因全外显子进行序列分析
• 二代测序（NGS）：同时筛查已知和新型变异位点

3. 代谢物比值测定

收集24小时尿液，采用LC-MS/MS联用技术同步定量尿嘧啶和二氢尿嘧啶浓度。当UH2/U比值<10时提示DPD缺陷，需调整药物剂量。

检测仪器

• 液相色谱仪（HPLC）：配备紫外检测器或荧光检测器，分离效率>20000理论塔板数
• 三重四极杆质谱仪：用于代谢物痕量检测，检测限可达0.1 ng/mL
• 实时PCR仪：支持熔解曲线分析，检测灵敏度达1%突变频率
• 基因测序平台：Illumina NovaSeq 6000等二代测序系统，通量>1000样本/次
• 全自动化学发光仪：用于快速筛查DPD酶活性，检测时间<2小时

质量保证

实验室应建立严格的质量控制体系：

• 每批检测设置正常和缺陷型对照样本
• 定期参加CAP或EMQN室间质评
• 基因检测需通过Sanger测序验证NGS结果
• 酶活性检测需控制细胞活力>95%

临床决策阈值

• 酶活性<70%参考值：需降低初始剂量50%
• 携带DPYD*2A纯合突变：禁用氟尿嘧啶类药物
• UH2/U比值<1.5：建议改用替代化疗方案

结论

DPD检测通过多维度评估患者的代谢能力，显著降低了氟尿嘧啶类药物相关毒性发生率。建议在临床实践中建立酶活性检测与基因筛查联合的检测路径，特别是对高危人群实施预防性筛查。未来随着质谱技术和生物信息学的发展，DPD检测将向更高灵敏度、更低成本和更快速报告的方向演进，为肿瘤精准治疗提供更有力的支持。

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