重组蛋白二硫键修复测试

信息概要

重组蛋白二硫键修复测试是一项针对重组蛋白中二硫键结构与功能的检测服务。二硫键是维持蛋白质高级结构和生物活性的关键因素，其正确形成与修复直接影响蛋白的稳定性、折叠效率及生物学功能。本检测通过分析二硫键的配对状态、氧化还原环境及修复效果，为药物开发、生物制剂生产及科研实验提供可靠数据支持。

该检测的重要性在于：确保重组蛋白在表达、纯化或储存过程中二硫键的正确形成，避免错误折叠导致的活性丧失或免疫原性风险；优化生产工艺，提高蛋白产物的收率与质量；满足 regulatory compliance（如FDA、EMA）对生物制品的关键质量属性（CQA）要求。

检测项目

• 二硫键配对正确率分析
• 游离巯基（-SH）含量测定
• 氧化型与还原型蛋白比例
• 二硫键异构化程度检测
• 蛋白质热稳定性评估
• 圆二色谱（CD）分析二级结构
• 荧光光谱检测折叠状态
• 非还原SDS-PAGE电泳验证
• 质谱法鉴定二硫键位点
• 酶活性恢复率测试
• 分子排阻色谱（SEC）纯度分析
• 动态光散射（DLS）粒径检测
• 表面等离子共振（SPR）结合活性
• ELISA法测定抗原表位完整性
• 还原剂耐受性实验
• 氧化应激条件下的稳定性
• 二硫键交换动力学研究
• 蛋白质聚集倾向分析
• NMR核磁共振结构验证
• X射线晶体学衍射分析

检测范围

• 单克隆抗体（mAb）
• 融合蛋白（如Fc融合蛋白）
• 细胞因子（如干扰素、白介素）
• 生长因子（如VEGF、EGF）
• 酶类重组蛋白（如凝血因子）
• 疫苗抗原蛋白
• 激素类蛋白（如胰岛素）
• 受体蛋白胞外域
• 病毒载体衣壳蛋白
• CAR-T细胞治疗用蛋白
• ADC药物抗体片段
• 纳米抗体（VHH）
• 胶原蛋白及其衍生物
• 纤维蛋白原类似物
• 溶栓药物（如tPA）
• 毒素-抗体偶联物
• 基因编辑相关蛋白（如Cas9）
• 诊断试剂用标记蛋白
• 细胞外基质蛋白
• 抗菌肽及防御素

检测方法

• Ellman法：定量检测游离巯基的经典比色法
• MALDI-TOF质谱：高通量二硫键定位分析
• RP-HPLC：反相色谱分离氧化/还原形态
• CE-SDS：毛细管电泳评估二硫键依赖性分子量
• DSC差示扫描量热法：测定热变性温度
• FTIR光谱：监测二硫键相关构象变化
• 荧光标记法：跟踪二硫键修复动力学
• 蛋白酶消化-MS/MS：肽段水平二硫键鉴定
• 非还原/还原Western Blot：比较二硫键状态
• 尺寸排阻色谱-多角度光散射（SEC-MALS）：检测聚集
• 表面增强拉曼光谱（SERS）：敏感检测二硫键振动
• 等温滴定量热法（ITC）：研究二硫键结合能
• 氢氘交换质谱（HDX-MS）：分析构象动态性
• 小角X射线散射（SAXS）：溶液态结构解析
• 微流控芯片电泳：快速筛查二硫键异质性

检测仪器

• 液相色谱仪（HPLC）
• 质谱仪（LC-MS/MS）
• 圆二色谱仪
• 荧光分光光度计
• 动态光散射仪（DLS）
• 差示扫描量热仪（DSC）
• 傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）
• 毛细管电泳系统
• 表面等离子共振仪（Biacore）
• 超分子排阻色谱（UPLC-SEC）
• 核磁共振波谱仪（NMR）
• X射线衍射仪
• 酶标仪（ELISA Reader）
• 微流控分析平台
• 自动化电泳系统