重组蛋白激酶活性检测

信息概要

重组蛋白激酶活性检测是一种用于评估激酶在生物体内或体外催化磷酸化反应能力的重要技术。激酶在细胞信号传导、代谢调控和疾病发生中扮演关键角色，因此其活性检测对于药物开发、疾病机制研究和生物标志物发现具有重要意义。本检测服务通过高灵敏度、高特异性的方法，为客户提供准确、可靠的激酶活性数据，支持科研与临床应用。

检测项目

• 激酶催化活性测定：评估激酶催化底物磷酸化的能力。
• 底物特异性分析：检测激酶对不同底物的选择性。
• 酶动力学参数（Km值）：测定激酶与底物的亲和力。
• 酶动力学参数（Vmax值）：评估激酶的最大反应速率。
• 抑制剂IC50测定：量化抑制剂对激酶活性的半数抑制浓度。
• 激活剂EC50测定：量化激活剂对激酶活性的半数有效浓度。
• ATP依赖性检测：评估激酶活性对ATP浓度的依赖性。
• 金属离子依赖性检测：分析激酶活性对Mg²⁺、Mn²⁺等金属离子的需求。
• pH依赖性检测：测定激酶活性在不同pH条件下的变化。
• 温度依赖性检测：评估激酶活性对温度的敏感性。
• 时间依赖性检测：分析激酶活性随时间的变化趋势。
• 磷酸化位点鉴定：确定激酶催化的底物磷酸化位点。
• 磷酸化效率测定：量化激酶催化磷酸化的效率。
• 蛋白浓度测定：检测激酶或底物的蛋白浓度。
• 纯度分析：评估重组激酶的纯度。
• 稳定性测试：分析激酶在储存或反应条件下的稳定性。
• 变构效应检测：评估变构调节剂对激酶活性的影响。
• 竞争性抑制分析：确定抑制剂是否与底物竞争结合位点。
• 非竞争性抑制分析：评估抑制剂是否与激酶其他位点结合。
• 反竞争性抑制分析：检测抑制剂是否与激酶-底物复合物结合。
• 底物饱和曲线：绘制激酶活性随底物浓度变化的曲线。
• 抑制剂剂量反应曲线：分析抑制剂浓度与激酶活性的关系。
• 激活剂剂量反应曲线：分析激活剂浓度与激酶活性的关系。
• 交叉反应性测试：评估激酶对其他类似底物的活性。
• 多激酶筛选：同时检测多种激酶的活性。
• 高通量筛选：适用于大规模激酶抑制剂或激活剂的筛选。
• 细胞内激酶活性检测：评估细胞裂解液中激酶的活性。
• 免疫沉淀激酶活性检测：通过免疫沉淀分离激酶并测定其活性。
• 放射性标记检测：利用放射性同位素标记测定激酶活性。
• 荧光偏振检测：通过荧光偏振技术分析激酶活性。

检测范围

• 蛋白激酶A（PKA）
• 蛋白激酶C（PKC）
• 蛋白激酶G（PKG）
• MAP激酶（MAPK）
• ERK激酶
• JNK激酶
• p38激酶
• Akt激酶
• mTOR激酶
• CDK激酶
• GSK-3激酶
• Src激酶
• Abelson激酶（Abl）
• EGFR激酶
• PDGFR激酶
• FGFR激酶
• VEGFR激酶
• IGF-1R激酶
• InsR激酶
• FAK激酶
• Lck激酶
• ZAP-70激酶
• BTK激酶
• Syk激酶
• JAK激酶
• ROCK激酶
• PAK激酶
• CAMK激酶
• PLK激酶
• Aurora激酶

检测方法

• 放射性同位素标记法：利用γ-³²P-ATP标记底物，检测磷酸化水平。
• ELISA法：通过酶联免疫吸附试验定量磷酸化底物。
• 荧光共振能量转移（FRET）：利用荧光标记检测激酶活性。
• 荧光偏振（FP）：通过荧光偏振变化分析激酶活性。
• 发光法：利用发光底物检测激酶活性。
• 比色法：通过显色反应测定磷酸化底物。
• Western Blot：通过免疫印迹检测磷酸化蛋白。
• 质谱法：利用质谱技术鉴定磷酸化位点。
• 微流体芯片技术：高通量检测激酶活性。
• 表面等离子共振（SPR）：实时监测激酶与底物或抑制剂的相互作用。
• 等温滴定量热法（ITC）：测定激酶与配体结合的热力学参数。
• 圆二色谱（CD）：分析激酶构象变化。
• 核磁共振（NMR）：研究激酶结构与动力学。
• X射线晶体学：解析激酶三维结构。
• 电泳迁移率变动分析（EMSA）：检测激酶与DNA/RNA的相互作用。
• 免疫沉淀激酶检测（IP-Kinase Assay）：分离激酶后测定其活性。
• 细胞热转移分析（CETSA）：评估激酶在细胞内的热稳定性。
• 高通量筛选（HTS）：自动化检测大量样品的激酶活性。
• 时间分辨荧光能量转移（TR-FRET）：高灵敏度检测激酶活性。
• 毛细管电泳（CE）：分离并检测磷酸化底物。
• 液相色谱（HPLC）：定量分析磷酸化产物。
• 生物传感器技术：实时监测激酶活性变化。
• 单分子检测技术：研究单个激酶分子的活性。
• 纳米粒子增强检测：提高激酶活性检测的灵敏度。
• 微尺度热泳动（MST）：测定激酶与配体的结合亲和力。

检测仪器

• 酶标仪
• 荧光分光光度计
• 液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）
• 气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）
• 核磁共振仪（NMR）
• X射线衍射仪
• 表面等离子共振仪（SPR）
• 等温滴定量热仪（ITC）
• 圆二色谱仪
• 毛细管电泳仪
• 液相色谱仪（HPLC）
• 微流体芯片系统
• 生物分子相互作用仪
• 单分子荧光显微镜
• 纳米粒子分析仪