激酶活性均相检测

信息概要

激酶活性均相检测是一种用于测定激酶催化活性的生物化学分析方法，通常在单一反应体系中进行，无需分离步骤。该检测对于药物筛选、信号通路研究和疾病诊断具有重要意义，能够评估激酶抑制剂的效果以及细胞内的磷酸化水平。

检测项目

• 激酶催化活性测定
• ATP消耗速率
• 底物磷酸化水平
• 酶动力学参数
• 抑制剂IC50值
• 时间依赖性活性变化
• 温度对活性的影响
• pH对活性的影响
• 金属离子依赖性
• 底物特异性分析
• 产物生成速率
• 荧光信号强度
• 发光信号检测
• 吸光度变化
• 反应线性范围
• 检测灵敏度
• 检测特异性
• 重复性评估
• 稳定性测试
• 干扰物质影响
• 酶浓度优化
• 底物浓度优化
• 反应时间优化
• 缓冲液成分分析
• 阳性对照验证
• 阴性对照验证
• 高通量筛选适应性
• 细胞裂解液背景校正
• 酶活性恢复测试
• 质量控制参数

检测范围

• 蛋白激酶
• 脂质激酶
• 糖激酶
• 丝氨酸/苏氨酸激酶
• 酪氨酸激酶
• 双重特异性激酶
• 细胞周期激酶
• MAP激酶
• AMP激活蛋白激酶
• 钙调蛋白激酶
• 受体酪氨酸激酶
• 非受体酪氨酸激酶
• Janus激酶
• 磷脂酰肌醇激酶
• Aurora激酶
• CDK激酶
• mTOR激酶
• Src家族激酶
• ABL激酶
• FAK激酶
• PKC激酶
• PKA激酶
• CK激酶
• GSK激酶
• JNK激酶
• ERK激酶
• p38激酶
• IKK激酶
• ROCK激酶
• RAF激酶

检测方法

• 荧光共振能量转移法，基于供体和受体荧光团之间的能量转移
• 时间分辨荧光法，利用长寿命荧光信号减少背景干扰
• 发光检测法，通过化学发光反应测量ATP消耗
• 吸光度法，监测NADH或类似物质的吸光变化
• 荧光偏振法，检测分子旋转速度的变化
• AlphaScreen技术，使用珠基放大信号
• 电化学发光法，结合电化学和发光检测
• 表面等离子体共振法，实时监测分子相互作用
• 酶联免疫吸附法，使用抗体检测磷酸化产物
• 质谱分析法，准确鉴定磷酸化位点
• 放射性测定法，利用标记的ATP进行检测
• 比色法，通过颜色变化定量产物
• 毛细管电泳法，分离并检测反应组分
• 液相色谱法，分析反应混合物
• 微流控技术，在微型装置中进行高通量检测
• 生物传感器法，使用固定化酶实时监测
• 纳米粒子增强法，提高检测灵敏度
• 免疫印迹法，半定量分析磷酸化水平
• 细胞成像法，在活细胞中可视化激酶活性
• 计算模拟法，通过软件预测活性变化

检测仪器

• 荧光酶标仪
• 发光检测仪
• 紫外可见分光光度计
• 微孔板读取器
• 液相色谱质谱联用仪
• 表面等离子体共振仪
• 毛细管电泳仪
• 液相色谱仪
• 生物分析仪
• 细胞成像系统
• 纳米粒子分析仪
• 电化学项目合作单位
• 放射性计数器
• 微量热仪
• 动态光散射仪

激酶活性均相检测常见问题包括：如何进行高通量激酶活性筛选？通常使用自动化荧光或发光酶标仪，结合均相检测试剂盒，实现快速并行测试。激酶活性检测在药物开发中有什么应用？它主要用于筛选激酶抑制剂，评估候选药物的效力和特异性，加速抗癌或抗炎药物研发。均相检测与传统方法相比有何优势？无需洗涤步骤，减少操作时间，提高通量，并降低交叉污染风险。