结肠扩张与束缚复合应激诱导慢性内脏高敏感肠易激综合征大鼠模型

肠易激综合征是一种以腹痛、腹胀、排便习惯改变为主要症状的功能性肠病。然而临床上并未观察到明显的器质性改变[1]，病情反复，难以完全治愈，严重影响患者生活质量[2]。随着近年来对其病因的基础研究的深入，生理-心理-社会医学模式参与IBS发病的观念被广泛接受，2016年《罗马IV》共识中明确指出IBS是脑肠互动障碍相关的疾病。流行病学数据表明，40%-90%的IBS患者同时会出现焦虑及抑郁症状。

[1] 黄芬, 苏斌, 罗宜. 中医护理干预用于肝郁脾虚型肠易激综合征患者中的价值分析 [J]. 基层医学坛, 2021,25(09): 1277-1278.

[2] Schönrich S, Brockow T, Franke T, et al. Analyzing the content of outcome measures in clinical trials on irritable bowel syndrome using the international classification of functioning, disability and health as a reference [J]. Rehabilitation (Stuttg), 2006, 45(3): 172-80.

1.实验材料

2.实验动物

SPF级SD孕鼠21只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司SCXK（京）2016-0011，经中国中医科学院中药研究所动物伦理委员会批准。动物饲养于中国中医科学院中药研究所SYXK（京）2020-0042。孕鼠生产后，每10只乳鼠与母鼠一起饲养，至28日龄脱离母乳后5只每笼饲养，自由饮食饮水。

3.慢性肠易激综合征模型大鼠的建立

乳鼠出生第7天分选雌性乳鼠，其中三窝雌性乳鼠共15只为正常组。其余雌性乳鼠于出生第7天至出生20天开始造模。造模乳鼠连续两周每日九点开始使用PTCA球囊刺激结肠，将经液体石蜡润滑的PTCA球囊插入乳鼠肛门内2 cm，注入空气至气囊完全膨胀，持续刺激1 min。结肠刺激后，束缚乳鼠前肢单笼单只母子分离三小时。结束母子分离后，再次使用PTCA球囊刺激乳鼠结肠并将乳鼠放回母鼠笼。雌性乳鼠出生28天后脱离母乳，分笼。造模大鼠于出生第5周按照糖水偏爱结果结合体重分为模型、给药组(模型组、中药方剂组、阳性药组)，每组12-14只。模型及给药组大鼠于第8周至第10周每日晚上束缚9小时并每日早上9点开始灌胃给药。

1.动物模型评价方法

1.1腹壁撤退反射（AWR）实验

大鼠出生第5周、第9周通过腹壁撤退反射（AWR）实验，进行大鼠内脏敏感性评价。将经液体石蜡润滑过的6F导尿管从大鼠肛门插入约4 cm深。大鼠适应3-5 min基本不动后，注入0.4-0.8 mL生理盐水至导管球囊中，每0.2 mL停顿并由第三方进行AWR评分。

1.2 结肠运动变化

大鼠在出生第9周,禁食24 h后进行结肠运动检测。将6F导尿管与三通管连接，通过压力换能器用Biopac MP150记录仪记录结肠运动曲线。将经液体石蜡润滑过的6F导尿管从大鼠肛门插入约4 cm深，并将导管固定在大鼠尾巴根部，注入0.4 mL生理盐水至导管球囊中，大鼠适应30 min后检测30 min。以5 min为一段，计算30 min的曲线下面积，其平均值为大鼠的结肠运动指数。

1.3 糖水偏爱检测

于大鼠出生第5周进行48小时的糖水训练，训练期间禁食，前24h给予1%蔗糖水，后24 h同时给予1%蔗糖水和纯净水进行训练并在后24 h三次交换蔗糖水及纯净水方位。大鼠糖水训练后于出生第5周、第9周分别进行糖水偏爱检测。大鼠单笼单只，禁食禁水14 h后，鼠笼上给予一瓶1%蔗糖水，一瓶纯净水。称重计算2 h内两瓶水的饮用量（g），通过公式，蔗糖偏嗜度（%）=蔗糖水饮用量/（蔗糖水饮用量+纯净水饮用量）×100%，计算各组大鼠蔗糖偏嗜度。

1.4 强迫游泳

于大鼠出生第10周进行强迫游泳检测。检测前一天，大鼠在23 ℃水中进行15min预游泳。正式实验时，将大鼠放入水深25cm水温23℃的透明圆筒（直径20 cm×20 cm）中，开始检测5 min。行为学检测仪器记录统计大鼠在测试时间内的不动时间

2.评价指标体系

根据IBS腹痛、腹泻以及抑郁的主要症状，对于IBS大鼠模型及进行药物评价时，主要检测以下指标：

2.1内脏敏感性

模型组大鼠与正常大鼠比较，AWR评分增高且有显著性差异，视为造模成功。

2.2结肠运动

模型组大鼠与正常大鼠比较，结肠运动指数增高且有显著性差异，视为造模成功。

2.3糖水偏爱检测

模型组大鼠与正常大鼠比较，蔗糖偏嗜度降低且有显著性差异，视为造模成功。

2.4强迫游泳检测

模型组大鼠与正常大鼠比较，不动时间增加且有显著性差异，视为造模成功。

3.实验结果

3.1各组大鼠AWR评分结果

如图1所示，出生第5周模型及各给药组大鼠与正常大鼠相比，注入生理盐水量为0.4、0.6 mL时AWR评分均显著增高，表明模型及给药组大鼠经过第一阶段造模后内脏敏感性均增高。

如图2所示，经过第二阶段造模、给药后，模型组大鼠在注入生理盐水量为0.4、0.6 mL时与正常组相比AWR评分依然显著增高；中药方剂组大鼠与模型大鼠相比注入生理盐水量为0.4、0.6 mL时AWR评分均显著下降；阳性药组大鼠与模型大鼠相比注入生理盐水量为0.4mL时AWR评分呈现下降趋势，阳性药组大鼠在注入生理盐水量为0.6 mL时与模型组相比AWR评分显著下降。

注：模型大鼠与正常大鼠组相比，#P＜0.05，###P＜0.001；各给药组大鼠与模型大鼠相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。图1 出生第5周正常与模型组大鼠AWR评分结果（n=10）

图2 出生第9周各组别大鼠AWR评分结果（n=12-15）

3.2各组大鼠结肠运动变化

如图3所示，第二阶段造模后模型大鼠结肠运动指数显著上升。与模型组大鼠相比，中药方剂、阳性药给药使大鼠结肠运动指数显著下降。

注：模型大鼠与正常大鼠组相比，#P＜0.05；各给药组大鼠与模型大鼠相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

图3 出生第9周各组别大鼠结肠运动指数（n=5-6）

3.3 各组大鼠糖水偏爱检测结果

如图4所示，第一阶段刺激造模后，模型及各给药组大鼠与正常大鼠相比较嗜糖度显著下降。在第二阶段造模、给药后，模型大鼠嗜糖度与正常大鼠相比依然显著降低；中药方剂、阳性药组大鼠嗜糖度与模型组相比均显著上升。

注：与正常大鼠组相比，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；各给药组大鼠与模型大鼠相比，***P＜0.001。

图4 各组别大鼠蔗糖偏嗜度（n=12-15）

3.4 强迫游泳检测结果

如图5所示，模型大鼠与正常大鼠相比不动时间显著增中药方剂组大鼠与模型大鼠相比不动时间显著减少；阳性药组大鼠与模型大鼠相比不动时间呈现下降趋势。

注：模型大鼠与正常大鼠组相比，###P＜0.001；各给药组大鼠与模型组大鼠相比，**P＜0.01。

图5 各组别大鼠强迫游泳检测结果（n=12-15）