DOCA诱导急性盐敏感性高血压小鼠模型

高血压是由多基因、多环境因素及个人不良习惯相互作用而导致的一种慢性复杂疾病，也是危害人类健康的主要疾病之一。盐是高血压的重要环境因素，个体对盐负荷或限盐呈现不同的血压反应，因此存在盐敏感性问题 [1]。盐敏感性是高血压、心脑血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和肾功能不全等）发病及致死的一个潜在危险因素[2]。因此在高血压临床诊治过程中，考虑盐敏感性将有利于对高血压分类、危险分级以及对症治疗。

盐敏感性通常涉及人口、种族、社会因素以及肾功能、激素水平和饮食习惯等[3]。不同种族和人群盐敏感性个体的检出率不同，而且血压的盐敏感性随年龄增长而变化，特别是高血压患者。盐敏感性由Weinberger[4]给出定义：静脉滴注2L生理盐水，测量平均动脉压（MAP），次日早晨给予低钠饮食后再测量MAP，两次MAP相差≥10mmHg为盐敏感性，否则为盐耐受性。Yatabe [5]定义盐敏感指数（SSI）为低盐和高盐饮食后MAP的差值与低盐饮食MAP的商，若SSI≥5%为盐敏感性。

高盐摄入引起血压升高主要有两方面原因：一方面是肾小管对Na+ 重吸收增加，导致水钠潴留，血浆容量增加，从而血压升高；另一方面是内源性哇巴因物质分泌增多，特异性抑制钠泵，胞内钠离子浓度增加，Na+/Ca2+交换体被激活，细胞内Ca2+ 浓度升高，最终导致血管平滑肌或心肌收缩，引起高血压。由于钠水平衡失调在盐敏感性高血压中起着主要的作用，DOCA盐造成高血压的方法被广泛应用[6]，但用的剂量和持续时间各不相同。一般是切除一侧肾脏，然后皮下或肌肉注射DOCA油剂或悬液，剂量为15-50mg不等，连续数周；也可皮下埋藏DOCA丸剂40-75mg，均溶于1%NaCl溶液。此动物有肾和血管病理改变。

其血压升高机制：制作过程中使用了大量的DOCA（醛固酮前提），它与醛固酮有相似的生理作用，反馈性抑制循环肾素-血管紧张素系统，导致血浆肾素活性低下，是一种低肾素型高血压模型。该模型是一种继发性高血压模型，与人类高血压中的原发性醛固酮增多症相似。故可用于原发性醛固酮增多所致的高血压研究。另外，文献中有用DOCA盐诱导的高血压大鼠进行肾脏的研究，如波生坦对高血压大鼠肾脏的保护作用的研究。另外，Ben-Ishay等在DOCA盐及一侧肾切除处理后的动物中选择血压高的血压不高的分别进行近亲交配，到第20代，确立了两系动物，即后来命名的以色列高血压大鼠（SBH）和以色列正常血压大鼠（SBN），前者血压比后者稍高，并对DOCA盐十分敏感。

1.C57小鼠，名称：C57，近交系（Inbred Rat）

品系来源 ：1)遗传背景及亚系:1921年Ltle用 Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57号与雄鼠52号交配，而得C57BL6。亚系:C57BL6、C57B/6、C57BL/6N等。 (2)毛色基因标记：aa、BB、CC（黑色） (3)主要遗传学特征：a免疫学特征：一般饲养条件下免疫球蛋白的量随年龄而增加，而到生后20个月时则1gG增长缓慢，无菌饲养的绝对量较低。gM水平较高，出生12月以后，有的个体超过80ug/mL。无菌饲养的动物lgM量比一般饲养的高。细胞免疫低下者少见，这可能与自发肿瘤少有关。b。形态学特征：在新生鼠中，雌鼠为16.8%，雄鼠3%为小眼或无眼症。0.6%后肢可见多趾症，另外水头症占2%4%，耳头症占0.4%，交合不全占3%。c生理学特性：有强嗜酒精性。对放射性照射为中等强度感应度，LD50为630+4R，将雄鼠皮肤移植到同系的雌鼠身上，约20日被排斥掉，这是因为在组织相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常显著。d癌发生率：乳癌发生率低，为01%，白血病为7%-16%化学致癌成功率低，放射性照射较容易诱发肝癌。

2.高血压对照小鼠：C57小鼠，名称：C57，同类系（Consomic Rat）

3.诱导方法：

（1）单侧肾切除：C57小鼠根据体重，三溴乙醇麻醉0.18ml/10g体重，（360mg/kg体重）（三溴乙醇储存液：25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇，使用液：0.50ml储存液+39.5ml生理盐水），俯卧位固定于加热垫上保持体温，腹部脱毛膏脱毛，酒精消毒处理，无菌手术剪剪开腹部皮肤，依次暴露表皮层，真皮层并裸露左肾，结扎左肾动脉，手术剪取下左肾，依次缝合真皮层表皮层，200ul青霉素注射。得单侧肾切除小鼠。

（2）皮下植入DOCA缓释泵：单侧肾切除三天之后，背部颈部脱毛膏脱毛，酒精消毒处理，无菌手术剪剪开后背颈部皮肤，用镊子将皮下探查出一个可以足够装下药品的空间，将DOCA 缓释泵塞入皮下，镊子将该处皮肤对齐复合，无菌缝合线缝合皮肤，放置在加热板上保暖，待苏醒后放回鼠盒，手术后用止痛果冻缓解疼痛。

（1）DOCA加单侧肾切除对小鼠血压的影响

C57小鼠单侧肾切除加DOCA之后，采用植入子电遥感检测小鼠血压情况。结果显示，对照组小鼠血压较为恒定，但是进行单侧肾切除外加DOCA之后，小鼠的收缩压显升高。说明单侧肾切除外加DOCA能够稳定的诱导小鼠血压的升高。成为研究盐敏感性高血压研究的理想模型。

（2）DOCA加单侧肾切除对小鼠外周血白细胞分化的影响

C57小鼠单侧肾切除加DOCA之后，采用流式细胞术检测小鼠外周血白细胞表达情况。结果显示，与对照组小鼠相比，进行单侧肾切除外加DOCA之后，高盐喂养的小鼠外周血白细胞的表达显著升高。说明单侧肾切除外加DOCA之后，小鼠对高盐干预变得十分敏感，高盐饮食能够稳定的诱导单侧肾切除外+DOCA外周血白细胞的大量表达高，从而为该盐敏感性高血压研究的理想模型提供了理论依据。

（3）DOCA加单侧肾切除对小鼠血管白细胞浸润的影响

C57小鼠单侧肾切除加DOCA之后，采用流式细胞术检测小鼠主动脉白细胞浸润情况。结果显示，与对照组小鼠相比，进行单侧肾切除+DOCA之后，高盐喂养的小鼠主动脉白细胞浸润显著升高。由（3）可知0说明单侧肾切除外加DOCA之后，小鼠对高盐干预变得十分敏感，高盐饮食能够稳定的诱导单侧肾切除外+DOCA外周血白细胞的大量表达高。外周血中大量表达分化的白细胞进一步浸润血管，诱发血管炎症反应，从而损伤血管使得血压调控收到损伤，进而发展成为为该盐敏感性高血压。

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。