细胞光老化Western blot检测

信息概要

• 细胞光老化Western blot检测是一种通过Western blot技术分析细胞在光老化过程中蛋白质表达变化的服务，主要用于研究紫外线等光辐射导致的皮肤老化机制，检测关键蛋白质如胶原蛋白、基质金属蛋白酶和抗氧化酶的表达水平。
• 该检测的重要性在于帮助科研机构和化妆品企业评估光防护产品的有效性，深入理解光损伤的分子通路，并为抗老化药物开发提供数据支持，从而推动皮肤健康领域的创新和发展。
• 本服务由第三方检测机构提供，确保结果客观、准确和可重复，涵盖样品处理、电泳分离、抗体检测和数据分析全流程，适用于多种细胞模型和样本类型。

检测项目

• Collagen I alpha-1
• Collagen III alpha-1
• Elastin
• Matrix Metalloproteinase-1 (MMP-1)
• Matrix Metalloproteinase-2 (MMP-2)
• Matrix Metalloproteinase-3 (MMP-3)
• Matrix Metalloproteinase-9 (MMP-9)
• Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 (TIMP-1)
• Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 (TIMP-2)
• Fibronectin
• Laminin
• Hyaluronan Synthase-2
• Hyaluronidase-1
• Superoxide Dismutase 1 (SOD1)
• Superoxide Dismutase 2 (SOD2)
• Catalase
• Glutathione Peroxidase (GPx)
• Heme Oxygenase-1 (HO-1)
• Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2)
• p53
• p21
• Bcl-2
• Bax
• Caspase-3
• Poly (ADP-ribose) polymerase (PARP)
• Nuclear Factor-kappa B (NF-kB)
• Inhibitor of kappa B-alpha (IkB-alpha)
• Extracellular Signal-Regulated Kinase (ERK)
• c-Jun N-terminal Kinase (JNK)
• p38 Mitogen-Activated Protein Kinase (p38 MAPK)
• Protein Kinase B (Akt)
• Transforming Growth Factor-beta (TGF-beta)
• Interleukin-6 (IL-6)
• Interleukin-1 beta (IL-1β)
• Tumor Necrosis Factor-alpha (TNF-alpha)

检测范围

• 人类皮肤成纤维细胞
• 人类角质形成细胞
• 人类黑色素细胞
• 小鼠皮肤细胞
• 大鼠皮肤细胞
• 猪皮肤细胞
• 原代细胞培养物
• 细胞系（如HaCaT）
• 表皮组织样本
• 真皮组织样本
• 全皮肤组织匀浆
• UV照射细胞模型
• 非照射对照细胞
• 光老化诱导细胞
• 抗氧化处理细胞
• 蛋白质提取物
• 细胞裂解液
• 组织 homogenates
• 细胞培养基上清液
• 细胞核提取物
• 细胞质提取物
• 线粒体提取物
• 细胞膜蛋白
• 细胞外基质蛋白
• 酶类蛋白质
• 信号转导蛋白质
• 凋亡相关蛋白质
• 炎症因子蛋白质
• 氧化应激标记蛋白质
• 细胞周期相关蛋白质
• DNA损伤响应蛋白质
• 自噬相关蛋白质
• 糖基化修饰蛋白质
• 磷酸化修饰蛋白质
• 泛素化修饰蛋白质

检测方法

• 样品制备：通过细胞裂解和离心提取蛋白质，确保样本纯度和浓度。
• 蛋白质定量：使用BCA或Bradford法测定蛋白质浓度，为电泳上样提供准确数据。
• SDS-PAGE电泳：在变性条件下分离蛋白质 based on molecular weight。
• 转膜：将蛋白质从凝胶转移到PVDF或硝酸纤维素膜上，用于抗体结合。
• 膜封闭：用BSA或脱脂牛奶封闭非特异性结合位点，减少背景噪声。
• 一抗孵育：与特定 primary antibody 结合 target protein overnight at 4°C。
• 二抗孵育：使用HRP或荧光标记的二抗与一抗结合，增强检测信号。
• 化学发光检测：应用EC底物产生光信号，用于成像和量化。
• 荧光检测：利用荧光二抗和扫描仪捕获信号，适用于多重检测。
• 条带成像：通过CCD相机或激光扫描仪获取Western blot图像。
• 图像分析：使用软件如ImageJ量化条带强度，计算相对表达水平。
• 内参蛋白校正：检测GAPDH或β-actin作为 loading control，确保数据标准化。
• 梯度稀释上样：制备浓度梯度样本，验证抗体线性范围和检测灵敏度。
• 抗体验证：通过 positive and negative controls 确认抗体特异性。
• 重复实验：进行三次独立实验，提高结果统计可靠性。
• 统计 analysis：应用t-test或ANOVA分析数据差异，计算p值。
• 优化条件：调整抗体浓度和孵育时间，以最大化信噪比。
• 膜再生： stripping and reprobing 膜以检测多个蛋白质。
• 快速Western blot：使用自动化系统缩短检测时间。
• 定量Western blot：结合 densitometry 进行绝对定量分析。
• 多重检测：同时检测多个蛋白质 using different fluorescent labels。
• 细胞 fractionation：分离细胞组分如核和胞质，用于特定蛋白定位。
• 蛋白质降解评估：通过检测 ubiquitination 或 proteasome activity。
• 磷酸化检测：使用 phospho-specific antibodies 分析信号通路激活。
• 氧化修饰检测：评估蛋白质 carbonylation 或 nitrosylation 水平。

检测仪器

• 电泳仪
• 转膜仪
• 化学发光成像系统
• 荧光扫描仪
• 离心机
• 分光光度计
• 微量离心管
• 摇床
• 孵育箱
• 蛋白质电泳槽
• 膜处理装置
• 条带分析软件
• 冰箱
• 冷冻离心机
• 水浴锅
• pH计
• 天平
• 移液器
• 紫外透射仪
• 凝胶成像系统