社会挫败小鼠模型

抑郁症是由抑郁症是一种严重影响人体健康的精神疾病，其患病率约占总人口的3%。世界卫生组织预测到2020年抑郁症将成为第二大主要疾病之一，给社会带来极大经济负担，抑郁症已成为全世界共同面临的卫生健康难题。近年来研究发现，应激性生活事件是抑郁症的显著促发因素，引发抑郁的主要原因是来自慢性、低强度、长期的日常压力。

目前，抑郁症尤其是中重度抑郁症的主要治疗手段仍是药物治疗。20多年以来，随着人们对抑郁症机制研究的深入，抗抑郁药物的研究开发也取得了极大进步。由于合成抗抑郁药大多存在抗抑郁谱窄、不良反应大、药价高和易复发等缺陷，人们逐渐把目光投向传统的中医药。传统药物和天然药物作为抗抑郁候选药物的研究开发已日渐成为国内外的热点。

采用社会失败应激，更好地模拟人类抑郁症的发生方式，建立动物模型对于探索抑郁症的病因学是很有必要的。另外，社会失败应激所导致兴趣缺失和社会逃避的抑郁行为是长久潜伏的，通过慢性而不是急性的抗抑郁治疗可以纠正社会失败应激所致的抑郁行为，我们的相关研究结果也与此一致(将另文报道)。通过社会失败应激模型，可以建立稳定的用于研究抑郁病理生理学的动物模型。

C57BL /6J小鼠。雄性多见。

1. 操作流程

实验前将小鼠随机分为对照组和应激组，每天将应激组C57BL /6 小鼠作为侵入者放入长期单独饲养CD1 小鼠的笼内，进行身体接触5 min。5 min 内C57BL /6 小鼠将受到CD1小鼠攻击并表现出逃跑、恐惧、顺从等从属性特征。5 min 身体接触后，使用透明并且有很多小孔的有机玻璃板将二者隔开进行心理应激24 h，保证C57BL /6 小鼠能看到CD1 小鼠，听到CD1 小鼠的声音，而且能闻到CD1 小鼠的气味，应激持续7d或21 d。应激结束后，将C57BL /6 小鼠单独饲养，进行行为学评价。

为了评估应激组C_57小鼠的社会交互行为，在接受最后一次攻击的24小时内开展社会交互实验。实验设备还包括40cmx40cmx40cm大小的白色开放场，7cmx10cmx 40cm大小穿孔透明塑料盒及录像设备。社会交互测试由两部分组成，每部分记录时长为2.5分钟。第一部分，将塑料空盒置于测试场一侧中央位置，轻轻提放被测试者(C57小鼠)于旷场中央，自由活动; 150秒后，将被测试者移除放于自身饲养笼中;同时将具有攻击性的CD1小鼠放在塑料盒内，准备结束后重新放入被测试者。前后两次操作中间的准备时间控制在30s内。分别记录2个部分动物在社会交互区的时间。社会交互区定义为以塑料盒为中心，允许C_57小鼠与盒子及里面的CD1鼠进行互动的区域。

2. 模型分析指标

2.1 悬尾实验

于造模结束后第3 天开始实验。将胶布贴于距小鼠尾尖部约1 cm 处，使小鼠倒挂于悬尾箱支架上，传感器接收小鼠挣扎时的张力变化信号，将信号处理转化后送往计算机，小鼠悬尾实时检测分析处理系统自动记录小鼠不动时间，实验总共6 min，适应2 min 后系统自动统计小鼠后4 min 内悬尾累积不动时间(“不动”即小鼠停止挣扎不动或无任何活动)。

2.2 强迫游泳

利用计算机图像实时检测分析处理系统自动分析记录动物运动状态。将小鼠放入小鼠强迫游泳仪器中( 高20 cm，直径18 cm，水深12 cm)，保持水温(23~25 °C)。动物适应2 min后，系统自动记录动物后4 min 内的累积不动时间( 不动状态即小鼠四肢有轻微动作以保持头部在水面，小鼠呈现出停止挣扎或呈漂浮状态)。

1. 不同时长社会挫败对悬尾不动时间的影响

可以从图1 看出，社会挫败造模21天后，模型组与空白组存在显著性差异，阳性药组可以显著性降低悬尾不动时间（P < 0.05）。

图1 不同时长社会挫败对悬尾不动时间的影响

2. 社会挫败对强迫游泳不动时间的影响

可以从图1 看出，社会挫败造模7天，强迫游泳不动时间就比空白组出现显著性增加（P< 0.05），但是造模14天并没有出现显著性差异（P > 0.05），造模21天后又出现显著性差异（P < 0.05）。

图2 不同时长社会挫败对强迫游泳不同时间的影响

本实验采用健康成年SPF级老鼠。饲料垫料均为高压灭菌产品，购自北京维通利华实验动物有限公司，动物用水均经过除菌处理。实验动物以完整的包装直接进入实验室，观察适应5天后无异常情况，方进行实验。实验过程中动物操作均符合动物伦理学规范，对环境和生态影响等符合国家相关法律规定。

给予动物鼠笼倾斜、潮湿垫料、高温、噪音、束缚、电击、游泳、昼夜节律颠倒等不同刺激因子，且刺激因子安排为多变性和不可预测，可诱导性是模型制造成功的关键。该模型被广泛用于抑郁症神经生物学机制及抗抑郁药物的研究，以及伴发的焦虑、学习记忆障碍及防护药物研究。

本研究中，通过水迷宫实验、避暗实验结果可以看CUMS模型组水迷宫寻台潜伏期显著性延长，避暗错误次数显著性增加、避暗潜伏期显著性减少等，这些行为学结果，提示大小鼠CUMS模型成功。此外本实验还对CUMS模型的机制进行了基础研究，认为CUMS模型会导致动物皮层的5-HT、DA、Ach、NE等神经递质水平显著性降低（P<0.05）。因此我们认为采用慢性不可预测应激，35天可以造成大鼠和小鼠学习记忆障碍。

模型技术难点在于对于CUMS刺激因子的选择，刺激因子的选择可能影响实验模型的成功与否，常用的刺激因子有禁食(12 h)、禁水(12 h)、冷水游泳(4 °C，5 min)、热水游泳(42 °C，5 min)、动物叫声(0.5 h)、束缚(使用自行研发的小鼠行为限制器，长20 cm，直径7 cm)、昼夜颠倒、配对饲养、湿笼、倾笼等。每日选择2~3 种刺激，并尽量使应激程序符合不可预测的特点，以避免动物产生适应性。相同的刺激因子应该隔3-7日再进行。

本研究通过不同的刺激因子对老鼠造成慢性不可预测应激模型，通过水迷宫、避暗等经典行为学指标，以及5-HT、DA、Ach、NE等神经递质基础机制指标，表明了慢性不可预测应激诱导老鼠学习记忆损伤模型的成功，并且该模型对于大小鼠具有相同的效果，本模型可用于进一步的改善学习记忆药物的药效学评价。