人食管癌细胞KYSE150荧光素酶标记BALB/cA-nu小鼠模型(

食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的2％。全世界每年约有20万人死于食管癌。

食管癌系指由食管鳞状上皮或腺上皮的异常增生所形成的恶性病变。其发展一般经过上皮不典型增生、原位癌、浸润癌等阶段。食管鳞状上皮不典型增生是食管癌的重要癌前病变。患者有食管内异物感，或自食物通过时缓慢或有梗噎感。也可表现为吞咽时胸骨后烧灼、针刺样或牵拉样痛。进展期食管癌则常因咽下困难就诊，吞咽困难呈进行性发展，甚至完全不能进食。常伴有呕吐、上腹痛、体重减轻等症状。病变晚期因长期摄食不足可伴有明显的营养不良、消瘦、恶病质，并可出现癌转移、压迫等并发症。

BALB/cA-nu小鼠，胸腺缺失，为第11对染色体隐性遗传，T细胞免疫缺陷，B细胞正常，具有较高的NK细胞活力，无接触敏感性，无移植排斥反应。

人食管癌细胞KYSE150是一种低分化的鳞癌细胞，呈上皮样。将LUC基因稳定整合到LUC染色体上，获得单克隆细胞株，具有很强的发光能力，传代数次后仍能稳定高水平表达LUC。细胞形态和未转染细胞无明显区别。

图1 荧光素酶标记的KYSE150细胞系的阳性克隆检测

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄6周，体重16—20 g。 BALB／cA-nu裸小鼠在实验室无特定病原体饲养间饲养。收集处于生长对数期的DsRed标记的KYSE150-LUC细胞肿瘤细胞，稀释至5×106cells／mL。取200μL细胞悬液进行尾静脉注射接种。

在接种的7、14、21、28天观察肿瘤的生长情况。在接种的第7天就可以观察到肿瘤荧光，出现肺部转移灶，通过肿瘤组织发出的荧光的光子数确定肿瘤的大小，随着观察天数的增加，肿瘤的体积和发光强度增加，且具有很好的相关性（图1）。

图1 人食管癌KYSE150-LUC尾静脉接种肿瘤模型

该小动物模型饲养在清洁级动物中，微生物处于监控状态，动物房有相应的保护措施，小鼠不会出现逃逸，不会对外界环境造成影响。