抗体样品重链C端测序实验

信息概要

抗体样品重链C端测序实验是一种用于确定抗体分子重链C端氨基酸序列的关键检测技术。该技术广泛应用于生物制药、临床诊断和基础研究领域，确保抗体的结构完整性和功能一致性。通过精准测序，可以验证抗体的正确表达、评估翻译后修饰（如糖基化）的影响，并检测可能的序列变异或降解产物。该检测对于抗体药物的质量控制、工艺优化以及 regulatory compliance 至关重要。

检测项目

• 重链C端氨基酸序列测定：确认抗体重链C端的准确氨基酸排列。
• 序列覆盖率分析：评估测序结果覆盖目标序列的完整性。
• 翻译后修饰检测：识别糖基化、磷酸化等修饰位点。
• 序列变异分析：检测可能存在的点突变或缺失。
• C端截短验证：确定是否存在非预期的C端截短现象。
• 信号肽残留检测：检查信号肽是否被完全切除。
• 二硫键定位：分析C端附近二硫键的形成情况。
• N-连接糖基化位点鉴定：识别潜在的N-糖基化位点。
• O-连接糖基化位点鉴定：识别潜在的O-糖基化位点。
• 脱酰胺化分析：检测天冬酰胺或谷氨酰胺的脱酰胺化。
• 氧化修饰检测：评估甲硫氨酸等氨基酸的氧化状态。
• C端赖氨酸残留：验证C端赖氨酸是否被完全切除。
• 序列同源性比对：与参考序列进行比对分析。
• 可变区序列确认：确保可变区序列的正确性。
• 恒定区序列确认：确保恒定区序列的正确性。
• 框架区分析：评估框架区的序列完整性。
• 互补决定区（CDR）验证：确认CDR区域的序列准确性。
• 等电点预测：基于序列预测抗体的等电点。
• 分子量计算：根据序列计算理论分子量。
• 疏水性分析：评估C端区域的疏水性特征。
• 电荷分布分析：分析C端区域的电荷分布情况。
• 序列重复检测：检查是否存在非预期的序列重复。
• 序列污染筛查：排除外源序列污染的可能性。
• 种属特异性验证：确认抗体的种属来源。
• 亚型鉴定：确定抗体的重链亚型（如IgG1、IgG2等）。
• 序列比对数据库检索：与公共数据库进行比对。
• 突变热点分析：识别可能的高频突变区域。
• 序列保守性评估：分析序列的进化保守性。
• 结构域边界确认：验证功能结构域的边界位置。
• 序列注释：对测序结果进行功能注释。

检测范围

• 单克隆抗体
• 多克隆抗体
• 人源化抗体
• 嵌合抗体
• 双特异性抗体
• 抗体片段（Fab）
• 抗体片段（F(ab')2）
• 单链抗体（scFv）
• 纳米抗体
• IgG类抗体
• IgM类抗体
• IgA类抗体
• IgE类抗体
• IgD类抗体
• 重组抗体
• 融合蛋白抗体
• 抗体偶联药物（ADC）
• 诊断用抗体
• 治疗用抗体
• 研究用抗体
• 鼠源抗体
• 兔源抗体
• 羊源抗体
• 鸡源抗体
• 骆驼源抗体
• 鲨鱼源抗体
• 转基因动物表达抗体
• 植物表达抗体
• 微生物表达抗体
• 细胞培养表达抗体

检测方法

• Edman降解测序：通过逐步切除N端氨基酸进行序列分析。
• 质谱测序（LC-MS/MS）：利用液相色谱-串联质谱进行高灵敏度测序。
• MALDI-TOF MS：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析。
• ESI-MS：电喷雾电离质谱分析。
• 高通量测序：基于NGS技术的深度测序方法。
• 毛细管电泳：高分辨率分离和检测技术。
• 液相色谱（HPLC）：用于肽段分离和纯化。
• 反向液相色谱（RP-HPLC）：基于疏水性分离肽段。
• 离子交换色谱：基于电荷差异分离蛋白质。
• 尺寸排阻色谱：基于分子大小分离蛋白质。
• Western blotting：用于特定序列的免疫检测。
• ELISA：基于抗原-抗体反应的定量检测。
• 肽质量指纹图谱：通过质谱鉴定酶解肽段。
• de novo测序：不依赖数据库的序列推导方法。
• 数据库搜索算法：如Mascot、SEQUEST等。
• 蛋白质N端测序：确定N端序列以辅助C端分析。
• C端化学标记：特异性标记C端氨基酸进行检测。
• 酶解图谱分析：通过特定酶解模式推导序列。
• 氢-氘交换质谱：研究蛋白质构象变化。
• 交联质谱：分析蛋白质间相互作用。
• 糖基化分析：特异性检测糖链结构。
• 圆二色谱：评估二级结构特征。
• 荧光标记测序：通过荧光信号检测序列。
• 放射性标记测序：利用放射性同位素标记。
• 生物信息学分析：计算机辅助序列预测和验证。

检测仪器

• 液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）
• 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF MS）
• 电喷雾电离质谱仪（ESI-MS）
• 液相色谱仪（HPLC）
• 毛细管电泳仪
• 蛋白质测序仪
• 圆二色谱仪
• 荧光分光光度计
• 紫外-可见分光光度计
• 凝胶成像系统
• Western blotting系统
• ELISA读数仪
• 离心机
• 超低温冰箱
• 生物分析仪