蛋白表达Western Blot测试

信息概要

蛋白表达Western Blot测试是一种常用的分子生物学技术，用于检测和定量特定蛋白质在样品中的表达水平。该测试基于抗原-抗体反应，通过电泳分离蛋白质、转膜、抗体孵育和化学发光检测等步骤，实现对目标蛋白的高特异性分析。检测的重要性在于，它广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断中，帮助评估基因表达、疾病标志物和药物效果。

检测项目

• 总蛋白浓度测定
• 目标蛋白表达水平
• 蛋白质分子量确认
• 蛋白质磷酸化状态
• 蛋白质糖基化分析
• 蛋白质降解产物
• 蛋白质二聚体或多聚体检测
• 蛋白质亚细胞定位
• 蛋白质表达动力学
• 蛋白质相互作用验证
• 蛋白质翻译后修饰
• 蛋白质丰度比较
• 蛋白质纯度评估
• 蛋白质活性相关表达
• 蛋白质异构体检测
• 蛋白质稳定性测试
• 蛋白质表达特异性
• 蛋白质表达重复性
• 蛋白质表达线性范围
• 蛋白质表达灵敏度
• 蛋白质表达背景控制
• 蛋白质表达标准化
• 蛋白质表达定量精度
• 蛋白质表达交叉反应
• 蛋白质表达批次一致性
• 蛋白质表达温度影响
• 蛋白质表达pH依赖性
• 蛋白质表达时间过程
• 蛋白质表达剂量响应
• 蛋白质表达病理相关性

检测范围

• 细胞裂解液样品
• 组织匀浆样品
• 血清或血浆样品
• 尿液样品
• 脑脊液样品
• 培养上清液样品
• 细菌表达系统
• 酵母表达系统
• 哺乳动物细胞表达系统
• 昆虫细胞表达系统
• 植物表达系统
• 重组蛋白质样品
• 膜蛋白样品
• 核蛋白样品
• 胞质蛋白样品
• 分泌蛋白样品
• 磷酸化蛋白样品
• 糖蛋白样品
• 脂蛋白样品
• 抗体样品
• 酶样品
• 激素样品
• 细胞因子样品
• 生长因子样品
• 肿瘤标志物样品
• 神经递质相关蛋白
• 病毒蛋白样品
• 细菌毒素蛋白
• 疫苗抗原蛋白
• 诊断试剂蛋白

检测方法

• SDS-PAGE电泳法：用于根据分子量分离蛋白质
• 湿式转膜法：将蛋白质从凝胶转移到膜上
• 半干式转膜法：转膜方法
• 化学发光检测法：通过发光信号检测蛋白质
• 荧光检测法：使用荧光标记抗体进行高灵敏度检测
• 比色法：基于颜色变化定量蛋白质
• 抗体孵育法：特异性结合目标蛋白
• 封闭步骤：减少非特异性结合
• 洗涤步骤：去除未结合抗体
• 蛋白浓度测定法：如BCA法或Bradford法
• 内参蛋白标准化法：确保数据可比性
• 图像分析法定量：使用软件分析条带强度
• 多重Western Blot法：同时检测多个蛋白
• 定量Western Blot法：准确测量表达水平
• 斑点印迹法：快速筛查蛋白表达
• 免疫沉淀Western Blot法：结合IP步骤
• 非变性电泳法：保持蛋白质天然状态
• 双向电泳法：高分辨率分离
• 毛细管电泳法：自动化快速检测
• 微流控Western Blot法：小型化检测

检测仪器

• 电泳仪
• 转印装置
• 化学发光成像系统
• 荧光扫描仪
• 微量分光光度计
• 离心机
• 振荡器
• 孵育箱
• 凝胶成像系统
• 蛋白电泳槽
• 膜处理设备
• 自动洗板机
• 条带分析软件
• pH计
• 天平

Western Blot测试中如何选择合适的内参蛋白？内参蛋白用于标准化样品加载量，常见选择包括β- actin或GAPDH，需根据样品类型和实验条件确定，以确保结果准确性。

Western Blot测试的灵敏度受哪些因素影响？灵敏度受抗体特异性、转膜效率、检测方法和样品处理影响，优化这些步骤可提高检测下限。

Western Blot测试在药物开发中有何应用？它用于评估药物对靶蛋白表达的影响，帮助筛选候选化合物和监测治疗效果，是临床前研究的关键工具。