人胰腺癌细胞PANC-1绿色荧光标记裸鼠模型

胰腺癌（pancreatic cancer）是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。胰腺癌临床表现取决于癌的部位、病程早晚、有无转移以及邻近器官累及的情况。其临床特点是整个病程短、病情发展快和迅速恶化。最多见的是上腹部饱胀不适、疼痛。虽然有自觉痛，但并不是所有病人都有压痛，如果有压痛则和自觉痛的部位是一致的。其它表现有黄疸、食欲不振消化道症状、消瘦乏力、腹部包块、腹水、症状性糖尿病、血栓性静脉炎等及其它。

胰腺癌的病因尚不十分清楚。其发生与吸烟、饮酒、高脂肪和高蛋白饮食、过量饮用咖啡、环境污染及遗传因素有关；近年来的调查报告发现糖尿病人群中胰腺癌的发病率明显高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人与胰腺癌的发病存在一定关系，发现慢性胰腺炎病人发生胰腺癌的比例明显增高。

人胰腺癌细胞PANC-1来自ATCC，呈多角形、上皮样贴壁生长。该细胞株源自于胰腺癌导管细胞，其倍增时间为52小时。染色体研究表明，该细胞染色体众数为63，包括3个独特标记的染色体和1个小环状染色体。该细胞的生长可被1 unit/ml的左旋天冬酰胺酶抑制；能在软琼脂上生长；能在裸鼠上成瘤。

裸鼠无胸腺裸鼠（NudeMouse，简称裸鼠），先天性胸腺缺陷的突变小鼠，是由于第Ⅶ连锁群（Linkage group）内裸体位点的等位基因发生纯合而形成的突变小鼠新品种。裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nn/+）各方面表现都正常。

1. 表达载体构建：构建chicken β-actin-GFP-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（thecytomegalovirus，CMV)早期增强子（earlyenhancer element）和鸡β-肌动蛋白（chickenbeta-actin）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。

2. PANC-1-eGFP荧光细胞系的获得：采用脂质体2000转染PANC-1细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取BALB／CA- nu裸鼠进行皮下接种，1×106个细胞/只。分别在接种的第7、14、21和28天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，SlideBook 4.0软件进行分析。

本模型将GFP基因转染到PANC-1中得到了高表达GFP细胞株。将PANC-1-GFP细胞经皮下接种至BALB／CA-nu裸鼠，用活体荧光成像系统连续观察。在皮下接种PANC-1-eGFP肿瘤细胞后第7天，用生物发光成像系统可以观察到肿瘤发光。随着观察天数的增加，荧光强度增强（图1）。

模型优点：1）无创伤性；2）可多次重复在不同时间点检测；3）快速扫描成像(时间<5 min)；4）动物整体成像；5）同一实验动物体内获得全部时间点的整体数据。

应用 此癌症模型利用无创伤活体荧光成像对癌细胞生长的检测，可对癌症治疗之前和过程中的癌细胞的变化进行实时观测和评估，可应用于癌症体内用药的疗法中。

该小动物模型饲养在清洁级动物中，微生物处于监控状态，动物房有相应的保护措施，小鼠不会出现逃逸，不会对外界环境造成影响。