高盐诱导盐敏感高血压大鼠模型

高血压是由多基因、多环境因素及个人不良习惯相互作用而导致的一种慢性复杂疾病，也是危害人类健康的主要疾病之一。盐是高血压的重要环境因素，个体对盐负荷或限盐呈现不同的血压反应，因此存在盐敏感性问题。盐敏感性是高血压、心脑血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和肾功能不全等）发病及致死的一个潜在危险因素。因此在高血压临床诊治过程中，考虑盐敏感性将有利于对高血压分类、危险分级以及对症治疗。

盐敏感性通常涉及人口、种族、社会因素以及肾功能、激素水平和饮食习惯等。不同种族和人群盐敏感性个体的检出率不同，而且血压的盐敏感性随年龄增长而变化，特别是高血压患者。盐敏感性由Weinberger给出定义：静脉滴注2L生理盐水，测量平均动脉压（MAP），次日早晨给予低钠饮食后再测量MAP，两次MAP相差≥10mmHg为盐敏感性，否则为盐耐受性。Yatabe定义盐敏感指数（SSI）为低盐和高盐饮食后MAP的差值与低盐饮食MAP的商，若SSI≥5%为盐敏感性。

对于盐敏感性高血压患者，高盐摄入引起血压升高主要有两方面原因：一方面是肾小管对Na+ 重吸收增加，导致水钠潴留，血浆容量增加，从而血压升高；另一方面是内源性哇巴因物质分泌增多，特异性抑制钠泵，胞内钠离子浓度增加，Na+/Ca2+交换体被激活，细胞内Ca2+ 浓度升高，最终导致血管平滑肌或心肌收缩，引起高血压。

1.Dahl/盐敏感大鼠(Dahl/SS),名称：SS/JrHsdMcwiCrlVr，近交系（Inbred Rat）

品系来源 ：1962年，Brookhaven国家实验室的LK Dahl从SD封闭群中选育出对NaCl引发的高血压敏感/抗性的大鼠种群，1986年，俄亥俄医学院的John P Rapp利用该核心群得到Dahl 盐敏感/抗性大鼠，Harlan实验室从俄亥俄医学院引进， Theodore Kurtz(UCSF, CA)从SS/Jr种群中一组同品系的对照Dahl/SS大鼠近交得到 Dahl /盐敏感大鼠，1991年以后，威斯康星医学院一直维持该种群 2001年引入Charles River ，2011年维通利华从Charles River引入第17代核心群。

2.盐敏感大对照鼠SS-13BN Rat，名称：SS-Chr13BN/McwiCrlVr，同类系（Consomic Rat）。

3.诱导方法：6周龄Dahl/盐敏感大鼠及盐敏感对照大鼠SS-13BN，分别给予高盐饮食（8%的NaCl）和低盐饮食（0.12%的NaCl），连续4周，每周测量血压。

1. 高盐饮食对血压的影响

高盐（8%的NaCl）喂养2周后，Dahl/盐敏感大鼠血压开始升高，4周后，盐敏感大鼠高盐喂养组血压显著高于对照组，而盐敏感对照大鼠组血压差异不显著。

图1. 高盐和低盐喂养后，盐敏感性血压大鼠和对照大鼠血压的变化

（注：* P<0.05， Dss+High saltvs. control+High salt, t test n=5；#P<0.05 vs.Dss+High salt vs. Dss+Low salt, t test, n=5）

2. 肾脏组织病理结果

Dahl/盐敏感大鼠高盐（8%的NaCl）喂养4周后，肾小管萎缩，敏感对照大鼠肾组织未见明显损伤。

图2.大鼠肾脏组织HE染色（×400倍）

3. 炎症细胞浸润

Dahl/盐敏感大鼠高盐（8%的NaCl）喂养4周后，CT3标记的T淋巴细胞及CD68标记的巨噬细胞在肾组织中表达显著多于对照组，肾脏发生炎症反应。

图3.大鼠肾脏组织CD3(T淋巴细胞)和CD68(巨噬细胞) 免疫组化（×400倍）

4. 血小板相关指标的测定

4.1 血小板活化测定：流式细胞术检测发现Dahl/盐敏感大鼠高盐（8%的NaCl）喂养4周后，P-选择素表达显著高于其它组，血小板发生活化；

图4. 盐敏感大鼠和对照大鼠高盐喂养和低盐喂养后血小板活化（注：*P<0.05, Dss-H vs. others, one-way ANOVA, Scheffe`s test，n=5）

4.2 血小板内钙离子浓度的测定：血小板内钙离子浓度Dahl/盐敏感大鼠高盐（8%的NaCl）喂养组显著高于其它组。

图5. 盐敏感大鼠和对照大鼠高盐喂养和低盐喂养后血小板内Ca2+的浓度（注：*P<0.05, Dss-H vs. others, one-way ANOVA, Scheffe`s test，n=5）

4.3 血小板细胞膜离子通道NHE-1表达量的变化：Dahl/盐敏感大鼠高盐（8%的NaCl）喂养组血小板细胞膜的那氢交换体1的表达量显著高于其它组。

图6. 盐敏感大鼠和对照大鼠高盐喂养和低盐喂养后血小板细胞膜NHE-1蛋白的表达（注：*P<0.05, Dss-H vs. others, one-way ANOVA, Scheffe`s test，n=5）

5.肾脏炎症因子IL-6的表达

免疫印迹结果显示，Dahl/盐敏感大鼠高盐（8%的NaCl）喂养组肾脏IL-6的表达显著高于其它组。

图7. 盐敏感大鼠和对照大鼠高盐喂养和低盐喂养后大鼠肾脏内IL-6的表达

（注：*P<0.05, Dss-H vs. others, one-way ANOVA, Scheffe`s test，n=5）

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。