DOCA诱导主动脉瘤小鼠模型

主动脉瘤(aortic aneurysm)指主动脉壁局部或弥漫性的异常扩张超过正常值50%以上，压迫周围器官而引起症状，常发生在升主动脉主动脉弓、胸部降主动脉、胸腹主动脉和腹主动脉，其发病率在老年人群中可以高达5-10%，并呈上升趋势。主动脉瘤可由多种因素引起，如家族遗传、高血压、动脉硬化等，其主要病理改变为血管壁弹力纤维断裂、平滑肌细胞病变和血管外膜胶原沉积。

由于主动脉瘤是一种慢性血管炎症性疾病，近年来可以诱发血管炎症的多种因素与该疾病的发生机制研究一直被人们关注，包括盐皮质激素、血管紧张素II等，其中醋酸脱氧皮质酮（DOCA）是一种类固醇激素，可以与体内的盐皮质激素受体结合，影响机体内钠水代谢，进而诱发慢性炎症反应。有研究表明高盐加DOCA缓释刺激可以通过激发血管的炎症反应而诱发小鼠动脉瘤的发生，并且该影响与年龄因素密切相关。本研究通过高盐加DOCA的方法建立小鼠血管瘤模型，并观察影响该疾病的相关通路因子，通过体内外实验增加或降低关键通路因子，进一步探索该疾病的病理生理发生机制，为该疾病的预防治疗提供新方法和思路。

1.C57小鼠，转基因动物（PSGL-1-KO小鼠） ，名称：C57，近交系（InbredRat）

品系来源 ：（1）遗传背景及亚系:1921年Ltle用 Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57号与雄鼠52号交配，而得C57BL6。亚系:C57BL6、C57B/6、C57BL/6N等。 (2)毛色基因标记：aa、BB、CC（黑色）(3)主要遗传学特征：a.免疫学特征：一般饲养条件下免疫球蛋白的量随年龄而增加，而到生后20个月时则1gG增长缓慢，无菌饲养的绝对量较低。gM水平较高，出生12月以后，有的个体超过80ug/mL。无菌饲养的动物lgM量比一般饲养的高。细胞免疫低下者少见，这可能与自发肿瘤少有关。b.形态学特征：在新生鼠中，雌鼠为16.8%，雄鼠3%为小眼或无眼症。0.6%后肢可见多趾症，另外水头症占2%4%，耳头症占0.4%，交合不全占3%。c.生理学特性：有强嗜酒精性。对放射性照射为中等强度感应度，LD50为630+4R，将雄鼠皮肤移植到同系的雌鼠身上，约20日被排斥掉，这是因为在组织相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常显著。d.癌发生率：乳癌发生率低，为01%，白血病为7%-16%化学致癌成功率低，放射性照射较容易诱发肝癌。

2.主动脉瘤对照小鼠：C57小鼠，名称：C57，同类系（ConsomicRat）

3.诱导方法：C57小鼠根据体重，三溴乙醇麻醉0.18ml/10g体重，（360mg/kg体重）（三溴乙醇储存液：25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇，使用液：0.50ml储存液+39.5ml生理盐水），俯卧位固定于加热垫上保持体温，背部颈部脱毛膏脱毛，酒精消毒处理，无菌手术剪剪开后背颈部皮肤，用镊子将皮下探查出一个可以足够装下药品的空间，将DOCA缓释泵塞入皮下，镊子将该处皮肤对齐复合，无菌缝合线缝合皮肤，放置在加热板上保暖，待苏醒后放回鼠盒，手术后用止痛果冻缓解疼痛。

1. 发现DOCA+HS处理两周时，年老的C57小鼠即开始形成动脉瘤。

图1.乙酸脱氧皮质酮（DOCA）加盐在不同时间点对衰老小鼠主动脉瘤的诱导作用。A.老龄小鼠的代表性超声图像和主动脉照片在不同的时间点使用DOCA加盐或单独加盐。B.量化腹主动脉的外径。C. 老年小鼠施用DOCA加盐或单独加盐后的存活曲线。D. 使用DOCA加盐或仅在不同时间加盐的成年小鼠的主动脉瘤发生率。

2. 乙酸脱氧皮质酮（DOCA）加盐对衰老小鼠在不同时间点的血管病理学的影响。

图2. A.来自DOCA加盐或单独加盐的不同时间点的老年小鼠苏木精和曙红（HE）的主动脉染色的代表性照片。B. Masson染色的代表性照片显示了不同组的胶原蛋白沉积。C. 弹性蛋白染色的代表性照片展示了来自不同群体的主动脉的弹性蛋白完整性。D. α-SMA（α-平滑肌肌动蛋白，血管平滑肌细胞）的免疫组织化学染色显示在DOCA加盐给药后平滑肌细胞变性。

3. 醋酸脱氧皮质酮（DOCA）加盐对衰老小鼠在不同时间点的炎症细胞浸润以及炎症细胞因子、粘附因子和纤维化因子表达的影响。

图3. A-C.免疫荧光检测在不同时间点给予DOCA加盐或盐单独处理的老龄小鼠主动脉组织中CD3阳性T细胞，CD68阳性巨噬细胞和ly6B.2阳性嗜中性粒细胞的浸润。D. 主动脉中促炎因子（TNF-α，IL-6，IL-1β，CCL-2）的mRNA表达水平逐渐升高，而抗炎因子（IL-10，IL-13）的mRNA表达水平逐渐降低老年小鼠的组织施用DOCA加盐。

4. 在DOCA加盐处理过的小鼠的主动脉中差异表达的基因的RNA序列分析。

图4. 在DOCA加盐处理过的小鼠的主动脉中差异表达的基因的RNA序列分析，这些小鼠已形成动脉瘤（n = 3），未发育到动脉瘤（n = 5）。A.给予DOCA加盐或仅加盐的成年小鼠主动脉之间转录差异的热图。 | logFC | ≥2和Padj <0.005被设置为严格截止。B. 使用Reactome Pathway数据库，以p <0.05为阈值，对上调和下调的差异表达基因进行GO富集分析。C. 热图显示了一些关键的差异表达基因，这些基因富含止血，免疫系统和细胞外基质组织途径。

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。