人胃癌细胞MGC803荧光素酶标记BALB/cA-nu小鼠模型

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位，胃癌可发生于任何年龄，每年约17万人死于胃癌。

恶性肿瘤胃癌起源于胃壁最表层的粘膜上皮细胞，可发生于胃的各个部位（胃窦幽门区最多、胃底贲门区次之、胃体部略少），可侵犯胃壁的不同深度和广度。癌灶局限在粘膜内或粘膜下层的称为早期胃癌，侵犯肌层以深或有转移到胃以外区域者称为进展期胃癌。肉眼或胃镜观察胃癌有多种形态，如表浅型、肿块型、溃疡型、浸润型、溃疡癌（为慢性胃溃疡癌变）。

BALB/cA-nu小鼠，胸腺缺失，为第11对染色体隐性遗传，T细胞免疫缺陷，B细胞正常，具有较高的NK细胞活力，无接触敏感性，无移植排斥反应。

稳定高表达Luc的单克隆细胞株获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆(图1箭头所示)，经过多次传代表达水平稳定，标记细胞的形态、生长方式、生长速度等与未转染细胞无明显差异。

图1荧光素酶标记的MGC803细胞系,箭头所指为MGC803-Luc+阳性克隆株

模型制作采用BALB／cA-nu裸小鼠，鼠龄5周，体重14—18 g。 BALB／cA-nu裸小鼠在实验室无特定病原体饲养间饲养。收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至2×106cells／mL。取250μL细胞悬液接种于已禁食24h的裸鼠胃壁浆膜下，并可见浆膜下鼓起一透亮小泡为标志。

分别在接种的7、14、21、28和35 d观察肿瘤的生长情况。观察前每只裸鼠腹腔注射荧光素底物(1．5 mg／lO g)，饱和三溴乙醇(0．18 mL／lO g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像。以肿瘤细胞发射的光子数对小鼠荷瘤时间作图，得到荧光素酶标记肿瘤细胞在裸鼠体内的生长曲线。肿瘤接种第7天，就可以观察到肿瘤发光，随着观察天数的增加，发光强度增强。图3发现肿瘤接种21d后进入对数生长期，28 d后肿瘤的发光强度逐渐减弱，推测肿瘤出现了坏死。

图2 胃原位接种MGC803-Luc+肿瘤生长影像分析(图为小鼠仰卧，小鼠右侧放一个三棱镜所拍摄)

图 3 荧光素酶标记的MGC803-Luc+肿瘤生长曲线

超声图像采集：肿瘤长到第五周时.使用小动物专用高分辨率超声仪和专用于小鼠的高频超声探头，进行B型超声检测。超声成像发现小鼠胃部有直径为8．39 mm，面积为28．92 mm 瘤块(图4A)。脱颈处死小鼠并解剖，暴露胃部，发现胃上有灰白色的肿瘤组织，表面呈结节状，质地较硬(图4B)

图4 胃原位接种35d后，A肿瘤小动物超声影像图像 B肿瘤解剖观察

该小动物模型饲养在清洁级动物中，微生物处于监控状态，动物房有相应的保护措施，小鼠不会出现逃逸，不会对外界环境造成影响。