细胞沉默自噬流LC3测试

信息概要

• 细胞沉默自噬流LC3测试是一种通过检测LC3蛋白的表达和转化来评估自噬过程的实验方法，广泛应用于生物医学研究和药物开发领域。
• 自噬是细胞内的关键降解机制，与多种疾病如癌症、神经退行性疾病和感染性疾病密切相关，因此准确检测自噬流对于理解疾病机制和开发治疗策略至关重要。
• 本检测服务提供全面的LC3测试，包括样本处理、多参数检测和数据分析，确保高精度和可靠性，支持科研和临床应用。

检测项目

• LC3-I蛋白表达水平
• LC3-II蛋白表达水平
• LC3-II/LC3-I比率
• 自噬流速率
• 自噬体数量
• 自噬溶酶体数量
• LC3 puncta formation
• 自噬相关基因表达（如ATG5、ATG7）
• 自噬抑制剂效果评估
• 自噬诱导剂效果评估
• 细胞存活率 after autophagy modulation
• 凋亡标记物表达（如Caspase-3）
• 线粒体自噬标记（如PINK1、Parkin）
• 内质网自噬标记（如FAM134B）
• chaperone-mediated autophagy markers（如LAMP2A）
• selective autophagy receptors（如p62/SQSTM1）
• ULK1激酶活性
• ATG5-ATG12 conjugate水平
• ATG7蛋白表达
• Beclin-1水平
• p62/SQSTM1蛋白水平
• LAMP1表达（lysosomal marker）
• Cathepsin酶活性
• Bafilomycin A1处理下的自噬流 assay
• GFP-LC3转染效率
• mRFP-GFP-LC3 assay for autophagic flux
• 电子显微镜自噬体计数
• Immunoblotting for LC3 conversion
• 流式细胞术 for LC3-positive cells
• Immunofluorescence for LC3 localization

检测范围

• 人类细胞系
• 小鼠细胞系
• 大鼠细胞系
• 原代细胞
• 组织切片
• 血液样本
• 脑组织
• 肝组织
• 肾组织
• 心脏组织
• 肺组织
• 皮肤细胞
• 神经元细胞
• 干细胞
• 癌细胞系
• 免疫细胞
• 上皮细胞
• 内皮细胞
• 肌肉细胞
• 脂肪细胞
• 昆虫细胞
• 植物细胞
• 酵母细胞
• 细菌样本
• 病毒感染的细胞
• 转基因细胞模型
• 敲除细胞系
• 过表达细胞系
• 临床样本
• 动物模型组织

检测方法

• Western blot：用于检测LC3蛋白水平和转化，通过电泳和抗体结合定量。
• 免疫荧光：可视化LC3 puncta形成，使用荧光显微镜观察定位。
• 流式细胞术：定量LC3阳性细胞，通过荧光信号分析细胞群体。
• 电子显微镜：直接观察自噬体超微结构，提供高分辨率图像。
• GFP-LC3 assay：通过荧光蛋白标记监测自噬流，适用于活细胞成像。
• mRFP-GFP-LC3 assay：区分自噬体和自噬溶酶体，基于pH敏感性荧光。
• qRT-PCR：检测自噬相关基因表达，通过RNA提取和反转录定量。
• ELISA：定量LC3蛋白，使用酶联免疫吸附 assay 进行高灵敏度检测。
• 免疫组化：用于组织样本中的LC3检测，通过抗体染色和显微镜分析。
• 活细胞成像：实时监测自噬过程，使用 time-lapse 显微镜技术。
• 自噬流抑制剂 assay：使用bafilomycin A1阻断自噬流，评估LC3积累。
• 自噬诱导剂 assay：使用rapamycin诱导自噬，检测LC3变化。
• 细胞 viability assay：评估自噬调制后的细胞存活，如MTT assay。
• 凋亡检测：如TUNEL assay，分析自噬与凋亡的交叉 talk。
• lysosomal activity assay：使用LysoTracker染料检测溶酶体功能。
• 蛋白酶活性 assay：如cathepsin assay，通过底物水解测量酶活。
• 蛋白质相互作用 assay：如co-immunoprecipitation，研究LC3结合伙伴。
• 基因沉默效率检测：如siRNA knockdown验证，确保沉默效果。
• 过表达效率检测：如Western blot for overexpression，确认蛋白表达水平。
• 统计分析方法：如ImageJ analysis for puncta counting，进行图像定量处理。

检测仪器

• Western blot apparatus
• Fluorescence microscope
• Flow cytometer
• Electron microscope
• Confocal microscope
• Microplate reader
• PCR machine
• Centrifuge
• Incubator
• Cell culture hood
• Autoclave
• Spectrophotometer
• Gel documentation system
• Liquid chromatography system
• Mass spectrometer