调味品PFGE检测

信息概要

• 脉冲场凝胶电泳（PFGE）是一种用于分离大分子DNA的分子分型技术，在调味品微生物检测领域主要用于食源性致病菌的溯源与分型分析，对保障食品安全和应对污染事件至关重要。
• 该检测服务通过对调味品中可能存在的致病微生物进行基因指纹图谱比对，帮助企业进行污染源排查、产品质量控制和风险评估，是确保调味品安全的关键技术手段。

检测项目

• 沙门氏菌PFGE分型
• 单核细胞增生李斯特氏菌PFGE分型
• 大肠杆菌O157:H7 PFGE分型
• 金黄色葡萄球菌PFGE分型
• 阪崎肠杆菌PFGE分型
• 蜡样芽孢杆菌PFGE分型
• 克罗诺杆菌PFGE分型
• 志贺氏菌PFGE分型
• 副溶血性弧菌PFGE分型
• 小肠结肠炎耶尔森氏菌PFGE分型
• 产气荚膜梭菌PFGE分型
• 肉毒梭菌PFGE分型
• 霍乱弧菌PFGE分型
• 空肠弯曲菌PFGE分型
• 乳酸菌PFGE分型（用于溯源）
• 酵母菌PFGE分型
• 霉菌PFGE分型
• 肠球菌PFGE分型
• 变形杆菌PFGE分型
• 肺炎克雷伯菌PFGE分型
• 阴沟肠杆菌PFGE分型
• 弗氏柠檬酸杆菌PFGE分型
• 粘质沙雷氏菌PFGE分型
• 嗜水气单胞菌PFGE分型
• 类志贺邻单胞菌PFGE分型
• 洋葱伯克霍尔德菌PFGE分型
• 铜绿假单胞菌PFGE分型
• 溶血性链球菌PFGE分型
• 海氏肠球菌PFGE分型
• 无乳链球菌PFGE分型

检测范围

• 酱油
• 食醋
• 味精
• 鸡精
• 复合调味料
• 酱类（豆瓣酱、黄豆酱等）
• 腐乳
• 蚝油
• 鱼露
• 料酒
• 香辛料调味粉（花椒粉、胡椒粉等）
• 火锅底料
• 调味油（辣椒油、花椒油等）
• 调味汁（烧烤汁、照烧汁等）
• 酱腌菜调味料
• 沙拉酱
• 蛋黄酱
• 芥末酱
• 番茄酱
• 辣椒酱
• 豆豉
• 调味料酒
• 调味醋（果醋等）
• 复合腌料
• 高汤调味料
• 增味剂
• 食用盐
• 糖（调味用糖粉等）
• 淀粉（烹饪用调味淀粉）
• 调味包（方便面调料包等）

检测方法

• 脉冲场凝胶电泳（PFGE）法：核心分型方法，利用交替变换的电场方向分离大片段DNA。
• 细菌基因组DNA制备：提取完整、未被剪切的高分子量DNA。
• 细胞包埋：将待测菌株的细胞包埋在琼脂糖凝胶块中。
• 细胞裂解：在凝胶块内原位裂解细胞，释放出DNA。
• DNA原位纯化：去除蛋白质和细胞碎片，得到纯净的DNA。
• 限制性内切酶酶切：使用稀有酶切位点的内切酶（如NotI, XbaI）对包埋的DNA进行酶切。
• 琼脂糖凝胶灌制：制备用于PFGE的琼脂糖凝胶。
• 上样：将酶切后的凝胶块嵌入凝胶加样孔中。
• 电泳参数设置：设置脉冲时间、电压、电场角度、温度、电泳时间等关键参数。
• 分子量标准品使用：使用标准分子量标记物（如沙门氏菌Braenderup H9812）进行比对。
• 凝胶染色：通常使用溴化乙锭（EB）或其他核酸染料对凝胶进行染色。
• 凝胶成像：在紫外透射仪或凝胶成像系统下观察并采集指纹图谱。
• 图谱数字化：将采集到的指纹图谱转化为数字信号。
• BioNumerics等软件分析：使用软件对指纹图谱进行标准化、条带识别和聚类分析。
• 菌株同源性分析：通过比对不同菌株的指纹图谱，判断其亲缘关系的远近。
• 标准操作程序（SOP）：遵循国际标准化操作流程（如CDC PulseNet的标准协议）以确保结果的可比性。
• 质量控制：包括使用对照菌株确保酶切、电泳等步骤的有效性。
• 结果判读与解释：根据聚类分析结果，出具菌株是否同源的分析报告。
• 数据存档与溯源：建立指纹图谱数据库，便于未来溯源和追踪。
• 报告编制：生成详细、规范的检测报告。

检测仪器

• 脉冲场凝胶电泳系统（PFGE仪）
• 化学发光成像系统
• 紫外透射仪
• 凝胶成像分析系统
• 恒温水浴锅
• 精密天平
• 高速离心机
• 涡旋混合器
• 电泳槽
• 微波炉
• pH计
• 超纯水系统
• 生物安全柜
• 恒温培养箱
• 冰箱和超低温冰箱