细胞Western blot实验

信息概要

• 细胞Western blot实验是一种基于抗原-抗体反应的蛋白质检测技术，用于分析特定蛋白质的表达、修饰和定位。
• 该技术的重要性在于其高特异性和灵敏度，广泛应用于生物医学研究、药物开发、疾病诊断和生物标志物验证。
• 我们的检测服务提供全面的Western blot分析，包括样品处理、电泳、转印、抗体检测和定量分析，确保准确可靠的结果。
• 通过标准化操作流程和质量控制，我们为客户提供高质量的检测数据，支持科研和临床应用。

检测项目

• Akt
• ERK1/2
• p38 MAPK
• JNK
• STAT3
• NF-κB
• β-catenin
• Cyclin D1
• p21
• p27
• Bcl-2
• Bax
• Caspase-3
• Tubulin
• GAPDH
• Actin
• Vinculin
• Integrin
• E-cadherin
• N-cadherin
• Vimentin
• Snail
• Twist
• MMP-2
• MMP-9
• VEGF
• EGFR
• HER2
• IGF-1R
• mTOR

检测范围

• 乳腺癌细胞系
• 肺癌细胞系
• 结肠癌细胞系
• 前列腺癌细胞系
• 肝细胞系
• 肾细胞系
• 神经元细胞
• 干细胞
• 免疫细胞
• 上皮细胞
• 间充质细胞
• 信号蛋白
• 结构蛋白
• 酶
• 受体
• 转录因子
• 细胞周期蛋白
• 凋亡相关蛋白
• 自噬相关蛋白
• 代谢酶
• 细胞骨架蛋白
• 膜蛋白
• 核蛋白
• 胞质蛋白
• 分泌蛋白
• 磷酸化蛋白
• 糖基化蛋白
• 泛素化蛋白
• 乙酰化蛋白
• 甲基化蛋白

检测方法

• 样品制备: 细胞裂解和蛋白质提取使用RIPA缓冲液。
• BCA assay: 用于精确测定蛋白质浓度。
• SDS-PAGE: 在聚丙烯酰胺凝胶中根据分子量分离蛋白质。
• 湿式转印: 将蛋白质从凝胶转移到PVDF膜。
• 半干转印: 快速转印方法，适用于小分子量蛋白质。
• 封闭: 使用5% BSA或脱脂牛奶封闭非特异性结合位点。
• 一抗孵育: 使用特异性一抗在4°C过夜孵育。
• 二抗孵育: 使用HRP或荧光标记的二抗室温孵育1小时。
• 化学发光检测: 应用ECL底物并通过成像系统捕获信号。
• 荧光Western blot: 使用荧光二抗和扫描仪检测。
• 显色检测: 使用DAB或NBT/BCIP底物产生颜色沉淀。
• 膜 stripping: 使用 stripping缓冲液去除抗体以重新 probing。
• 内参蛋白检测: 检测GAPDH或β-actin作为加载控制。
• 定量分析: 使用ImageJ软件进行条带密度定量。
• 磷酸化特异性检测: 使用磷酸化特异性抗体检测磷酸化状态。
• 糖基化检测: 通过 lectin blot或糖基化抗体检测。
• 泛素化检测: 使用抗 ubiquitin抗体检测泛素化蛋白。
• 非还原电泳: 在不含还原剂条件下电泳以保持二硫键。
• 2D gel electrophoresis: 结合等电聚焦和SDS-PAGE用于复杂样品。
• 毛细管电泳Western: 高通量自动化Western blot。

检测仪器

• 电泳槽
• 电源供应器
• 转印装置
• 摇床
• 孵育箱
• 化学发光成像系统
• 荧光扫描仪
• 分光光度计
• 离心机
• 水浴锅
• 微波炉
• 膜切割器
• 条带分析软件
• 自动化液体处理系统
• 冰箱