高通量RNA测序文库制备

信息概要

高通量RNA测序文库制备是分子生物学研究中的重要技术，通过对RNA样本进行建库处理，为后续测序分析提供高质量的数据基础。该技术广泛应用于基因表达分析、转录组研究、非编码RNA鉴定等领域，为疾病机制研究、药物开发及精准医疗提供关键技术支持。

检测的重要性在于确保文库质量符合测序要求，包括片段大小分布、浓度、纯度及适配体连接效率等指标。高质量的文库制备可显著提高测序数据的准确性和可靠性，避免因建库问题导致的数据偏差或浪费。

本检测服务涵盖从RNA样本质检到最终文库构建的全流程监控，采用国际标准化的操作流程和质控体系，确保检测结果的可重复性和可比性。

检测项目

• RNA完整性检测：评估RNA样本的降解程度
• RNA浓度测定：准确量化RNA样本的含量
• 28S/18S比值：评估核糖体RNA完整性
• RIN值测定：RNA完整性的数字化评分
• DV200值：评估片段化RNA的质量
• rRNA残留量：检测核糖体RNA去除效率
• polyA富集效率：评估mRNA富集效果
• RNA片段化程度：控制cDNA合成前的片段大小
• cDNA合成效率：评估逆转录反应效果
• 双链cDNA产量：测定第二链合成产物量
• 末端修复效率：检测DNA末端平端化效果
• 3'端加A效率：评估测序适配体连接准备情况
• 适配体连接效率：检测测序接头连接成功率
• 文库片段大小：测定最终文库的片段分布
• 文库浓度：量化最终文库的产量
• 文库摩尔浓度：计算可用于测序的分子数量
• PCR扩增偏倚：评估扩增引入的序列偏差
• 文库复杂度：检测文库中独特分子的比例
• GC含量偏差：评估文库中GC含量的分布
• 接头二聚体含量：检测未连接产物的污染程度
• 外源DNA污染：评估样本中外源核酸的污染
• 酶残留检测：确认建库过程中酶的清除效果
• 磁珠纯化效率：评估各步骤纯化回收率
• 测序引物结合效率：检测测序引物结合位点完整性
• 文库稳定性：评估文库存储条件下的降解情况
• 批次间一致性：确保不同批次制备的可重复性
• 阳性对照检测：验证建库系统的灵敏度
• 阴性对照检测：监控建库过程的交叉污染
• 测序数据质量：评估上机测序的初始数据质量
• 基因覆盖均匀度：检测文库中基因区域的覆盖偏差

检测范围

• 总RNA测序文库
• mRNA测序文库
• small RNA测序文库
• lncRNA测序文库
• circRNA测序文库
• 单细胞RNA测序文库
• 空间转录组测序文库
• 链特异性RNA测序文库
• 全转录组测序文库
• 低起始量RNA测序文库
• 降解RNA测序文库
• FFPE样本RNA测序文库
• 外泌体RNA测序文库
• 微生物转录组测序文库
• 植物RNA测序文库
• 病毒RNA测序文库
• 免疫转录组测序文库
• 肿瘤RNA测序文库
• 发育转录组测序文库
• 应激反应转录组文库
• 药物处理转录组文库
• 时间序列转录组文库
• 比较转录组测序文库
• 差异表达分析文库
• 可变剪切分析文库
• 融合基因检测文库
• 新转录本发现文库
• 等位基因特异性表达文库
• 表观转录组测序文库
• 翻译组测序文库

检测方法

• Agilent 2100 Bioanalyzer检测：基于微流控芯片的核酸质量分析
• Qubit荧光定量：高灵敏度核酸定量方法
• Nanodrop分光光度法：快速核酸纯度检测
• RT-qPCR：定量检测特定RNA序列
• 毛细管电泳：核酸片段大小分布分析
• 数字PCR：绝对定量核酸分子数
• RNA完整性检测：评估RNA降解程度
• 磁珠纯化：核酸片段大小选择
• 酶标仪检测：微量核酸定量分析
• 凝胶电泳：直观检测核酸片段
• 高通量测序：文库质量最终验证
• ELISA：检测酶残留
• 比色法：快速检测核酸浓度
• 荧光标记法：检测适配体连接效率
• PCR效率检测：评估扩增偏倚
• 杂交捕获效率检测：评估目标区域富集
• 质谱分析：检测核酸修饰
• 流式细胞术：单细胞文库质量评估
• 数字液滴技术：单分子检测
• 微流控技术：微量样本处理
• 化学发光检测：高灵敏度核酸定量
• 热循环仪检测：评估PCR扩增效率
• 电化学检测：核酸杂交效率分析
• 显微镜检测：空间转录组质量评估
• 生物传感器检测：实时监控酶反应

检测仪器

• Agilent 2100 Bioanalyzer
• Qubit Fluorometer
• Nanodrop Spectrophotometer
• QuantStudio Real-Time PCR System
• Fragment Analyzer
• Illumina NovaSeq
• Illumina HiSeq
• Illumina MiSeq
• Bio-Rad CFX
• Thermal Cycler
• Covaris S220
• Bioruptor
• Beckman Coulter Biomek
• KingFisher Flex
• Centrifuge
• Microplate Reader
• Fluorescence Microscope
• Mass Spectrometer
• Flow Cytometer
• Digital PCR System