SYBR Green RNA检测

信息概要

SYBR Green RNA检测是一种基于荧光染料的核酸定量技术，广泛应用于RNA样本的纯度、浓度及完整性分析。该检测通过SYBR Green染料与RNA结合后产生的荧光信号，实现对RNA的高灵敏度、高特异性检测。其重要性在于确保RNA样本的质量，为下游实验（如qPCR、转录组测序等）提供可靠数据基础，避免因RNA降解或污染导致的实验失败。

检测项目

• RNA浓度检测：测定RNA样本的绝对浓度，确保符合实验要求。
• RNA纯度检测：通过A260/A280比值评估蛋白质污染程度。
• RNA完整性检测：分析RNA是否发生降解，确保样本完整性。
• DNA污染检测：检测RNA中是否存在基因组DNA残留。
• 降解产物分析：评估RNA样本中是否存在小片段降解产物。
• 二级结构检测：分析RNA的二级结构稳定性。
• 荧光信号强度：量化SYBR Green与RNA结合后的荧光值。
• 批次一致性检测：确保同一批次RNA样本的质量一致性。
• 环境稳定性测试：评估RNA在不同储存条件下的稳定性。
• 酶抑制物检测：检测RNA中是否含有抑制逆转录或PCR的杂质。
• pH值检测：测定RNA溶液的酸碱度是否适宜。
• 盐离子浓度检测：评估缓冲液中盐离子对实验的影响。
• 内参基因表达量：验证RNA样本中内参基因的表达稳定性。
• 外源RNA污染检测：排查样本中是否存在外源RNA污染。
• rRNA比例分析：评估真核生物RNA中rRNA占比是否正常。
• mRNA富集效率：检测mRNA富集后的回收率及纯度。
• poly(A)尾长度检测：分析mRNA的poly(A)尾完整性。
• 稀有转录本检测：验证低丰度转录本是否可被有效检出。
• 引物二聚体分析：排查qPCR中引物二聚体的干扰。
• 荧光阈值循环数：测定Ct值以评估RNA的起始量。
• 扩增效率检测：验证qPCR反应的扩增效率是否达标。
• 熔解曲线分析：通过熔解峰判断PCR产物的特异性。
• 标准曲线斜率：评估定量方法的线性范围及灵敏度。
• 重复性测试：检验同一样本多次检测的结果一致性。
• 交叉污染检测：排查不同样本间的交叉污染风险。
• 冻融稳定性：评估RNA样本经冻融循环后的质量变化。
• 运输稳定性测试：模拟运输条件对RNA质量的影响。
• 长期储存稳定性：分析长期储存后RNA的降解情况。
• 逆转录效率检测：评估RNA逆转录为cDNA的效率。
• 模板稀释线性：验证不同稀释倍数下的检测线性关系。

检测范围

• 总RNA提取物
• mRNA富集样本
• 小RNA（如miRNA）
• 病毒RNA
• 细菌RNA
• 真菌RNA
• 植物RNA
• 动物组织RNA
• 血液RNA
• 细胞培养RNA
• FFPE样本RNA
• 单细胞RNA
• 外泌体RNA
• 环境样本RNA
• 合成RNA
• 核糖体RNA
• 线粒体RNA
• 叶绿体RNA
• circRNA
• lncRNA
• siRNA
• shRNA
• 引物/探针
• RNA标准品
• RNA文库
• RNA疫苗
• RNA药物
• RNA修饰样本
• RNA-蛋白复合物
• 环境污染物RNA

检测方法

• 紫外分光光度法：通过A260/A280比值评估RNA纯度。
• 荧光染料法：利用SYBR Green定量RNA浓度。
• 毛细管电泳：分析RNA完整性及片段分布。
• qPCR：定量特定RNA转录本的表达量。
• RT-qPCR：将RNA逆转录后定量检测。
• 数字PCR：绝对定量RNA分子数。
• Northern blot：检测RNA的大小及表达水平。
• RNA-Seq：高通量测序分析RNA序列及表达谱。
• 熔解曲线分析：判断PCR产物特异性。
• 标准曲线法：通过已知浓度标准品定量RNA。
• 竞争性PCR：加入内标定量低丰度RNA。
• 微流控芯片：快速检测RNA质量指标。
• 纳米孔测序：实时分析RNA序列及修饰。
• 质谱法：检测RNA的分子量及修饰状态。
• ELISA：间接检测RNA-蛋白复合物。
• 杂交法：通过探针检测特定RNA序列。
• 电化学检测：利用电极信号量化RNA。
• 等温扩增：无需热循环的RNA检测技术。
• 流式细胞术：结合荧光标记分析RNA。
• 原位杂交：定位组织内RNA的分布。
• 生物传感器：实时监测RNA结合事件。
• 动态光散射：评估RNA聚合状态。
• 表面等离子共振：检测RNA相互作用动力学。
• 原子力显微镜：观察RNA的纳米级结构。
• 拉曼光谱：分析RNA的化学组成。

检测仪器

• Nanodrop分光光度计
• Qubit荧光计
• Agilent 2100生物分析仪
• 实时荧光定量PCR仪
• 毛细管电泳仪
• 数字PCR系统
• 高通量测序仪
• 紫外可见分光光度计
• 微流控芯片阅读器
• 纳米孔测序仪
• 质谱仪
• 酶标仪
• 流式细胞仪
• 原子力显微镜
• 拉曼光谱仪