重组蛋白二硫键氧化还原测试

信息概要

重组蛋白二硫键氧化还原测试是生物制药和生物技术领域中的关键质量控制环节，主要用于评估重组蛋白中二硫键的正确形成与氧化还原状态。二硫键对蛋白质的稳定性、折叠构象及生物活性具有决定性作用，因此该检测对于确保药物安全性、有效性及合规性至关重要。通过检测，可精准识别二硫键的异常连接或断裂，为生产工艺优化和产品放行提供科学依据。

检测项目

• 二硫键数量测定：定量分析蛋白中二硫键的总数。
• 游离巯基含量：检测未形成二硫键的游离巯基数量。
• 二硫键配对正确率：评估二硫键是否正确配对。
• 氧化态蛋白比例：测定样品中氧化态蛋白的占比。
• 还原态蛋白比例：测定样品中还原态蛋白的占比。
• 二硫键稳定性：评估二硫键在不同条件下的稳定性。
• 二硫键异构化检测：识别二硫键的异构化现象。
• 二硫键断裂率：量化二硫键断裂的比例。
• 分子量测定：验证蛋白分子量与理论值的一致性。
• 电泳纯度分析：通过电泳评估蛋白纯度。
• 圆二色谱分析：检测蛋白二级结构变化。
• 荧光光谱分析：评估蛋白折叠状态。
• 质谱鉴定：准确鉴定二硫键位置。
• HPLC纯度检测：通过液相色谱分析纯度。
• 紫外吸收光谱：测定蛋白的紫外吸收特性。
• 动态光散射：分析蛋白的聚集状态。
• 等电点测定：确定蛋白的等电点。
• N端序列分析：验证蛋白N端序列正确性。
• C端序列分析：验证蛋白C端序列正确性。
• 肽图分析：通过酶解和色谱分析肽段。
• 糖基化修饰检测：评估糖基化对二硫键的影响。
• 磷酸化修饰检测：评估磷酸化对二硫键的影响。
• 乙酰化修饰检测：评估乙酰化对二硫键的影响。
• 蛋白聚集度：测定蛋白聚集体的比例。
• 蛋白溶解度：评估蛋白在溶液中的溶解性。
• 热稳定性分析：检测蛋白在高温下的稳定性。
• 酶活性测定：验证蛋白的生物活性。
• 结合活性测定：评估蛋白与配体的结合能力。
• 内毒素检测：确保样品无内毒素污染。
• 宿主蛋白残留：检测宿主细胞蛋白残留量。

检测范围

• 单克隆抗体
• 双特异性抗体
• 融合蛋白
• 细胞因子
• 生长因子
• 酶类蛋白
• 激素类蛋白
• 疫苗抗原
• 重组疫苗
• 基因治疗载体蛋白
• 诊断用重组蛋白
• 凝血因子
• 干扰素
• 白介素
• 抗体片段
• 纳米抗体
• ADC药物
• 重组人血清白蛋白
• 胶原蛋白
• 纤维蛋白
• 病毒样颗粒
• 受体蛋白
• 配体蛋白
• 转录因子
• 信号肽
• 抗菌肽
• 毒素蛋白
• 结构蛋白
• 膜蛋白
• 核蛋白

检测方法

• Ellman法：定量检测游离巯基含量。
• 质谱法：准确鉴定二硫键位置和数量。
• RP-HPLC：反相色谱分析蛋白纯度和二硫键状态。
• SEC-HPLC：分子排阻色谱评估蛋白聚集。
• CE-SDS：毛细管电泳分析蛋白纯度。
• IEF：等电聚焦测定蛋白等电点。
• CD光谱：圆二色谱分析蛋白二级结构。
• 荧光光谱：评估蛋白折叠状态。
• DLS：动态光散射检测蛋白粒径分布。
• MALDI-TOF：基质辅助激光解吸电离质谱鉴定蛋白。
• Edman降解：N端序列分析。
• LC-MS/MS：液相色谱-串联质谱肽图分析。
• Western Blot：免疫印迹验证蛋白特异性。
• ELISA：酶联免疫吸附测定蛋白活性。
• SPR：表面等离子共振检测结合活性。
• ITC：等温滴定量热法测定结合常数。
• DSC：差示扫描量热法分析热稳定性。
• FTIR：红外光谱分析蛋白结构。
• X射线晶体学：解析蛋白三维结构。
• NMR：核磁共振分析蛋白动态结构。
• 酶活性测定：分光光度法检测酶活性。
• 细胞活性测定：基于细胞的活性分析。
• LAL试验：鲎试剂法检测内毒素。
• HCP ELISA：宿主细胞蛋白残留检测。
• 肽质量指纹图谱：质谱法鉴定蛋白。

检测仪器

• 液相色谱仪
• 质谱仪
• 毛细管电泳仪
• 圆二色谱仪
• 荧光分光光度计
• 动态光散射仪
• 等电聚焦仪
• 紫外分光光度计
• 表面等离子共振仪
• 差示扫描量热仪
• 红外光谱仪
• 核磁共振仪
• X射线衍射仪
• 酶标仪
• 电泳系统