工作细胞库蛋白测试

信息概要

工作细胞库蛋白测试是生物制药和细胞治疗领域中的关键质量控制环节，旨在确保细胞库中蛋白质的稳定性、功能性和一致性。该检测服务通过第三方机构提供，覆盖从基础蛋白表达量到复杂功能活性的全面分析，为药物研发、生产及临床应用的合规性提供数据支持。

检测的重要性在于：通过精准量化细胞库中目标蛋白的表达水平、修饰状态及生物学活性，可有效避免因蛋白异常导致的批次间差异或治疗失效风险，同时满足FDA、EMA等监管机构对细胞治疗产品的严格质控要求。

本服务涵盖重组蛋白、抗体、酶类等多种产物，采用国际标准化方法（如ISO 17025）进行检测，确保数据可靠性和认可度。

检测项目

• 蛋白浓度检测：定量分析样品中总蛋白或特定目标蛋白的含量。
• SDS-PAGE纯度分析：通过电泳评估蛋白样品的纯度及分子量分布。
• Western Blot验证：特异性检测目标蛋白的存在及表达水平。
• 等电点测定：分析蛋白质的电荷特性及翻译后修饰影响。
• 内毒素检测：确保样品中细菌内毒素含量符合药典标准。
• 宿主细胞蛋白残留：量化生产过程中残留的宿主源性杂质。
• DNA残留检测：测定样品中宿主细胞DNA的残留量。
• N-糖基化分析：表征蛋白的糖基化修饰类型及程度。
• O-糖基化分析：检测丝氨酸/苏氨酸连接的糖链结构。
• 唾液酸含量测定：评估糖蛋白末端唾液酸化水平。
• 聚集体分析：检测蛋白高分子量聚集体的形成情况。
• 片段化分析：评估蛋白降解或剪切产生的片段比例。
• 肽图分析：通过酶解和质谱鉴定蛋白的氨基酸序列完整性。
• 二硫键定位：确定蛋白中二硫键的连接方式及正确性。
• 圆二色谱（CD）分析：研究蛋白的二级结构组成（α螺旋、β折叠等）。
• 动态光散射（DLS）：测量蛋白粒径分布及溶液稳定性。
• 差示扫描量热法（DSC）：评估蛋白的热稳定性及变性温度。
• ELISA活性检测：定量测定目标蛋白的生物学活性。
• 细胞增殖抑制试验：评估治疗性蛋白的功能性效应。
• 受体结合实验：验证蛋白与靶标受体的特异性结合能力。
• 酶动力学参数：测定酶的Km、Vmax等催化特性。
• 氧化修饰检测：鉴定蛋氨酸、半胱氨酸等残基的氧化状态。
• 脱酰胺分析：评估天冬酰胺转化为天冬氨酸的比率。
• N端序列验证：确认重组蛋白的N端氨基酸序列正确性。
• C端序列验证：通过质谱或化学法测定C端序列完整性。
• 游离巯基定量：检测未形成二硫键的游离半胱氨酸数量。
• 渗透压测定：监控蛋白制剂的渗透压合规性。
• 外观检查：评估样品的颜色、澄清度及可见异物。
• pH值测定：确保制剂pH符合工艺控制标准。
• 无菌测试：通过培养法确认样品的微生物污染情况。

检测范围

• 重组人源化抗体
• 单克隆抗体（mAb）
• 双特异性抗体
• 抗体偶联药物（ADC）
• 融合蛋白
• 细胞因子（如干扰素、白介素）
• 生长因子（如EGF、VEGF）
• 酶替代治疗蛋白
• 凝血因子
• 疫苗抗原蛋白
• CAR-T细胞分泌蛋白
• 干细胞衍生蛋白
• 病毒载体包装蛋白
• 基因编辑工具蛋白（如Cas9）
• 诊断用标记蛋白
• 受体-Fc融合蛋白
• 纳米抗体
• 多肽激素
• 溶瘤病毒蛋白
• 膜蛋白提取物
• 分泌型信号蛋白
• 伴侣蛋白
• 转录调控蛋白
• 核糖体蛋白
• 线粒体蛋白
• 细胞外基质蛋白
• 跨膜转运蛋白
• 蛋白酶抑制剂
• 自噬相关蛋白
• 凋亡诱导蛋白

检测方法

• BCA法：基于铜还原反应的比色定量法。
• Lowry法：酚试剂显色测定蛋白浓度。
• Bradford法：考马斯亮蓝染料结合定量。
• 紫外分光光度法：利用280nm吸光度估算蛋白浓度。
• 反相液相色谱（RP-HPLC）：分离分析疏水性蛋白。
• 尺寸排阻色谱（SEC）：评估蛋白聚集体及片段。
• 离子交换色谱（IEX）：根据电荷差异分离蛋白变体。
• 毛细管电泳（CE）：高分辨率分析微量样品。
• 质谱（MS）：准确测定分子量及修饰位点。
• ELISA：酶联免疫吸附测定特异性蛋白含量。
• 表面等离子共振（SPR）：实时监测分子互作动力学。
• 等温滴定量热法（ITC）：测定结合热力学参数。
• 荧光偏振（FP）：分析小分子与蛋白的结合。
• 静态光散射（SLS）：绝对分子量测定。
• 傅里叶变换红外光谱（FTIR）：二级结构表征。
• 核磁共振（NMR）：解析蛋白三维结构。
• 微流控芯片电泳：快速高通量纯度分析。
• 糖链释放与标记：PNGaseF酶解结合HPLC分析。
• Edman降解：N端序列测定。
• MALDI-TOF MS：肽质量指纹图谱鉴定。
• LC-MS/MS：肽段序列及修饰位点解析。
• 动态光散射（DLS）：溶液状态粒径监测。
• 纳米颗粒跟踪分析（NTA）：单颗粒粒径统计。
• 微生物限度测试：薄膜过滤法计数。
• 鲎试剂法（LAL）：内毒素定量检测。

检测仪器

• 液相色谱仪（HPLC）
• 超液相色谱仪（UPLC）
• 质谱仪（LC-MS）
• 毛细管电泳仪
• 圆二色谱仪
• 动态光散射仪
• 差示扫描量热仪
• 表面等离子共振仪
• 酶标仪
• 荧光分光光度计
• 紫外分光光度计
• 傅里叶变换红外光谱仪
• 核磁共振波谱仪
• 纳米颗粒分析仪
• 生物分析仪（Agilent 2100）