抗体恒定区完整性实验

信息概要

抗体恒定区完整性实验是一种用于评估抗体药物或生物制品中恒定区结构完整性和功能性的关键检测项目。该检测对于确保抗体的稳定性、效价以及药物安全性至关重要，尤其在生物制药研发和生产过程中，恒定区的完整性直接影响抗体的免疫效应功能（如ADCC、CDC）和药代动力学特性。第三方检测机构通过的技术手段，为客户提供全面、合规的检测服务，助力药物研发和质量控制。

检测项目

• 恒定区分子量测定：通过质谱分析确认抗体恒定区的分子量是否符合预期。
• N-糖基化分析：检测恒定区Fc段糖基化修饰的类型和比例。
• C端赖氨酸缺失：评估C端赖氨酸是否存在缺失或修饰。
• 氧化修饰检测：分析恒定区甲硫氨酸等氨基酸的氧化程度。
• 脱酰胺化检测：检测天冬酰胺和谷氨酰胺的脱酰胺化水平。
• 二硫键完整性：验证恒定区二硫键的正确配对和稳定性。
• 聚集体含量：测定抗体恒定区相关的高分子量聚集体。
• 片段化分析：检测恒定区是否发生非特异性降解或断裂。
• 电荷异质性：通过电荷变异分析评估恒定区修饰或降解。
• Fc受体结合活性：测定恒定区与FcγR、FcRn等受体的结合能力。
• 补体C1q结合活性：评估恒定区激活补体途径的功能。
• ADCC活性：检测抗体依赖性细胞毒作用的效价。
• CDC活性：测定补体依赖性细胞毒作用的效价。
• 热稳定性：通过DSC分析恒定区的熔解温度（Tm）。
• pH稳定性：评估不同pH条件下恒定区的结构完整性。
• 酶解敏感性：分析特定蛋白酶对抗体恒定区的切割效率。
• 表面疏水性：通过荧光探针检测恒定区疏水区域的变化。
• 圆二色谱分析：评估恒定区二级结构的稳定性。
• 动态光散射：测定恒定区在溶液中的粒径分布和聚集状态。
• SEC-HPLC：通过分子排阻色谱分析单体纯度及聚集体含量。
• CE-SDS：毛细管电泳检测恒定区片段和降解产物。
• RP-HPLC：反相色谱分析恒定区的疏水性变异。
• 肽图分析：通过酶解和LC-MS/MS鉴定恒定区序列和修饰位点。
• 游离巯基检测：定量恒定区中未形成二硫键的游离巯基。
• 糖链结构解析：通过MALDI-TOF或LC-MS分析糖链组成。
• 翻译后修饰筛查：全面检测恒定区的非预期修饰（如糖化、乙酰化）。
• 批次一致性比对：评估不同生产批次间恒定区特性的差异。
• 强制降解研究：通过加速稳定性实验评估恒定区降解途径。
• 生物类似药可比性：对比原研药与生物类似药的恒定区特性。
• 宿主细胞蛋白残留：检测与恒定区共纯化的宿主蛋白污染。

检测范围

• IgG1单克隆抗体
• IgG2单克隆抗体
• IgG4单克隆抗体
• IgA抗体
• IgM抗体
• IgD抗体
• IgE抗体
• 双特异性抗体
• 抗体药物偶联物（ADC）
• Fc融合蛋白
• 纳米抗体
• 重组多克隆抗体
• 人源化抗体
• 嵌合抗体
• 鼠源抗体
• 兔源抗体
• 骆驼源抗体
• 鲨鱼源抗体
• 鸡源抗体
• 羊源抗体
• 牛源抗体
• 猪源抗体
• 猴源抗体
• 转基因动物抗体
• 植物表达抗体
• 酵母表达抗体
• 哺乳动物细胞表达抗体
• 昆虫细胞表达抗体
• 大肠杆菌表达抗体
• 体外展示技术抗体

检测方法

• 液相色谱-质谱联用（LC-MS）：高精度分析恒定区分子量和修饰。
• 尺寸排阻色谱（SEC-HPLC）：分离并定量单体与聚集体。
• 毛细管电泳（CE-SDS）：检测恒定区片段和电荷变异。
• 反相液相色谱（RP-HPLC）：评估疏水性修饰或降解。
• 离子交换色谱（IEX-HPLC）：分析电荷异质性。
• 圆二色谱（CD）：测定恒定区二级结构变化。
• 动态光散射（DLS）：监测溶液中的聚集状态。
• 差示扫描量热法（DSC）：评估热稳定性参数。
• 表面等离子共振（SPR）：定量Fc受体结合动力学。
• 酶联免疫吸附试验（ELISA）：检测特定修饰或功能活性。
• 肽图分析（Peptide Mapping）：通过酶解和质谱鉴定修饰位点。
• MALDI-TOF质谱：快速测定糖链分子量。
• UPLC-MS/MS：高灵敏度解析复杂修饰。
• 荧光光谱：检测表面疏水性或构象变化。
• 静态光散射（SLS）：绝对分子量测定。
• 核磁共振（NMR）：原子级分辨率的结构分析。
• 微流成像（MFI）：可视化亚可见颗粒。
• 糖链释放与标记：分析N-糖基化谱。
• Edman降解：N端序列验证。
• Western Blot：特定片段或修饰的免疫检测。
• 细胞毒性试验（ADCC/CDC）：功能活性评估。
• 加速稳定性实验：强制降解条件下的完整性研究。
• 氢氘交换质谱（HDX-MS）：构象动态分析。
• 傅里叶变换红外光谱（FTIR）：二级结构快速筛查。
• 纳米颗粒跟踪分析（NTA）：粒径分布测定。

检测仪器

• 液相色谱仪（HPLC）
• 超液相色谱仪（UPLC）
• 质谱仪（LC-MS）
• 毛细管电泳仪（CE）
• 圆二色谱仪
• 动态光散射仪（DLS）
• 差示扫描量热仪（DSC）
• 表面等离子共振仪（SPR）
• 酶标仪
• MALDI-TOF质谱仪
• 核磁共振仪（NMR）
• 微流成像仪（MFI）
• 静态光散射仪（SLS）
• 荧光光谱仪
• 傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）