RNAi干扰效果测试

信息概要

RNAi（RNA干扰）是一种基因沉默技术，通过双链RNA分子特异性地降解靶标mRNA，从而抑制基因表达。RNAi干扰效果测试旨在评估RNAi实验的效率、特异性和稳定性，确保其在功能基因组学、药物开发和疾病治疗中的应用可靠性。检测RNAi效果对于验证基因功能、优化实验条件以及避免脱靶效应至关重要，能够提高研究的准确性和可重复性。

检测项目

• 靶基因mRNA表达水平
• 蛋白质表达水平
• 干扰效率百分比
• 脱靶效应评估
• 细胞活力变化
• siRNA/shRNA浓度优化
• 时间依赖性效果
• 剂量依赖性效果
• 特异性验证
• 稳定性测试
• 转染效率
• 内参基因表达
• 细胞凋亡指标
• 增殖能力影响
• 形态学变化
• 基因敲低持久性
• RNA完整性
• 细胞毒性评估
• 荧光报告基因活性
• 信号通路影响
• 代谢产物变化
• 细胞周期分析
• 炎症因子表达
• 氧化应激指标
• 酶活性检测
• 免疫印迹验证
• 实时荧光定量PCR
• 微阵列分析
• 高通量测序
• 生物信息学分析

检测范围

• siRNA干扰效果测试
• shRNA干扰效果测试
• miRNA模拟物测试
• lncRNA干扰测试
• circRNA干扰测试
• 病毒载体介导RNAi测试
• 非病毒载体介导RNAi测试
• 体外细胞系RNAi测试
• 动物模型RNAi测试
• 植物RNAi测试
• 原代细胞RNAi测试
• 干细胞RNAi测试
• 肿瘤细胞RNAi测试
• 神经细胞RNAi测试
• 免疫细胞RNAi测试
• 细菌RNAi测试
• 酵母RNAi测试
• 昆虫细胞RNAi测试
• 鱼类模型RNAi测试
• 哺乳动物组织RNAi测试
• 高通量RNAi筛选
• 基因治疗相关RNAi测试
• 药物筛选RNAi测试
• 功能基因组学RNAi测试
• 表观遗传学RNAi测试
• 代谢疾病模型RNAi测试
• 感染性疾病RNAi测试
• 发育生物学RNAi测试
• 癌症研究RNAi测试
• 神经退行性疾病RNAi测试

检测方法

• 实时荧光定量PCR：通过荧光探针定量检测mRNA水平变化
• Western Blot：分析蛋白质表达以验证基因沉默效果
• 流式细胞术：评估细胞表面标记或荧光报告基因表达
• 免疫荧光染色：可视化细胞内蛋白定位和表达
• ELISA：定量检测特定蛋白浓度
• MTT assay：测定细胞活力以评估毒性
• CCK-8 assay：基于细胞代谢活性评估增殖
• RNA测序：全面分析转录组变化和脱靶效应
• 微阵列技术：高通量检测基因表达谱
• 荧光素酶报告基因 assay：测量启动子活性
• 细胞凋亡检测：使用Annexin V/PI染色分析
• 细胞周期分析：通过PI染色评估DNA含量
• CRISPR筛选：结合RNAi验证基因功能
• 原位杂交：定位mRNA在组织中的表达
• Northern Blot：检测RNA大小和表达量
• 质粒转染效率测试：使用GFP等标记评估
• 液相色谱：分析代谢产物变化
• 质谱分析：鉴定蛋白质组学变化
• 生物发光成像：活体评估RNAi效果
• 电镜观察：超微结构变化分析

检测仪器

• 实时荧光定量PCR仪
• Western Blot成像系统
• 流式细胞仪
• 荧光显微镜
• 酶标仪
• 离心机
• 核酸提取仪
• 电泳系统
• 超微量分光光度计
• 细胞培养箱
• 生物分析仪
• 高通量测序仪
• 质谱仪
• 冰冻切片机
• 活体成像系统

RNAi干扰效果测试中，如何评估脱靶效应？通常通过RNA测序或微阵列分析比较处理组和对照组的全基因组表达谱，识别非特异性基因变化。

RNAi干扰效果测试在药物开发中的应用是什么？它用于筛选靶点基因，验证药物作用机制，并优化siRNA/shRNA制剂以提高治疗效率。

RNAi干扰效果测试为何需要检测细胞活力？因为高浓度RNAi试剂可能引起细胞毒性，影响结果准确性，因此需同步评估活力以确保效果特异性。