Pull-downassay结合检测

信息概要

Pull-down assay是一种广泛应用于生物化学和分子生物学领域的实验技术，主要用于检测蛋白质与蛋白质、蛋白质与核酸或其他生物分子之间的相互作用。该检测通过将一种“诱饵”蛋白固定在固相支持物上，然后与含有潜在“猎物”分子的溶液孵育，从而特异性结合并分离相互作用的分子。Pull-down assay的重要性在于其能够验证已知的相互作用、发现新的结合伴侣，并为功能研究提供关键证据，广泛应用于药物开发、信号通路分析和疾病机制探索。

检测项目

• 蛋白质与蛋白质相互作用
• 蛋白质与DNA结合能力
• 蛋白质与RNA相互作用
• 配体与受体结合
• 酶与底物结合
• 抗体与抗原结合
• 小分子与靶蛋白相互作用
• 复合物形成分析
• 结合亲和力测定
• 特异性结合验证
• 非特异性结合评估
• 结合动力学研究
• 温度依赖性结合
• pH依赖性结合
• 离子强度影响分析
• 竞争性结合实验
• 突变对结合的影响
• 翻译后修饰对结合的作用
• 细胞内相互作用模拟
• 跨物种结合比较
• 结合位点定位
• 定量结合分析
• 高通量筛选应用
• 稳定性测试
• 重现性验证
• 背景噪声控制
• 阳性对照设置
• 阴性对照设置
• 样品纯度评估
• 缓冲液优化测试

检测范围

• 重组蛋白
• 细胞裂解物
• 组织提取物
• 血清样本
• 纯化抗体
• 核酸片段
• 小分子化合物
• 病毒颗粒
• 细菌蛋白
• 酵母提取物
• 植物蛋白
• 哺乳动物细胞系
• 原代细胞
• 线粒体组分
• 核提取物
• 胞质组分
• 膜蛋白
• 分泌蛋白
• 磷酸化蛋白
• 糖基化蛋白
• 泛素化蛋白
• 乙酰化蛋白
• 甲基化蛋白
• 凋亡相关蛋白
• 信号通路蛋白
• 转录因子
• 染色质相关蛋白
• 核糖体蛋白
• 酶复合物
• 病毒蛋白

检测方法

• GST pull-down assay：利用谷胱甘肽-S-转移酶标签固定诱饵蛋白进行结合检测
• His-tag pull-down assay：通过组氨酸标签与金属螯合树脂结合分离相互作用
• Biotin pull-down assay：使用生物素标记和链霉亲和素珠进行高亲和力结合
• Co-immunoprecipitation：基于抗体特异性捕获蛋白质复合物
• RNA pull-down assay：设计RNA探针检测蛋白质与RNA的相互作用
• DNA pull-down assay：固定DNA序列研究蛋白质与DNA的结合
• Far-western blotting：将蛋白印迹与pull-down结合进行相互作用验证
• Surface plasmon resonance：实时监测结合动力学参数
• Isothermal titration calorimetry：通过热量变化测定结合热力学
• Fluorescence polarization：利用荧光偏振评估结合事件
• Electrophoretic mobility shift assay：通过电泳迁移变化分析核酸结合
• Cross-linking pull-down：使用交联剂稳定弱相互作用后进行分离
• Tandem affinity purification：通过双重标签纯化提高特异性
• High-throughput pull-down：自动化平台进行大规模相互作用筛选
• Quantitative mass spectrometry：结合质谱进行定量相互作用组学分析
• ELISA-based pull-down：利用酶联免疫吸附 assay 格式进行检测
• Microscale thermophoresis：通过温度梯度测量结合亲和力
• Nuclear magnetic resonance：使用NMR技术解析结合界面
• X-ray crystallography：通过晶体结构分析结合细节
• Circular dichroism：监测结合引起的构象变化

检测仪器

• 微量离心机
• 摇床孵育器
• 蛋白质电泳系统
• Western blotting装置
• 荧光显微镜
• 酶标仪
• 质谱仪
• 表面等离子共振仪
• 等温滴定量热仪
• 荧光偏振仪
• 核磁共振谱仪
• X射线衍射仪
• 圆二色谱仪
• 液相色谱仪
• 紫外可见分光光度计

Pull-down assay结合检测中如何优化非特异性结合控制？通常通过添加BSA或牛奶封闭剂、优化洗涤缓冲液条件和使用阴性对照来减少背景信号。

Pull-down assay适用于哪些类型的生物样品？它可应用于细胞裂解物、纯化蛋白、组织提取物、血清及核酸样品，广泛用于体外相互作用研究。

Pull-down assay与co-IP检测有何主要区别？Pull-down assay通常使用标签蛋白和固相支持物进行体外结合，而co-IP依赖抗体在更接近生理条件下捕获内源性复合物。