炎症相关基因表达qPCR测试

信息概要

炎症相关基因表达qPCR测试是一种利用实时荧光定量PCR技术检测与炎症反应相关的基因表达水平的分子生物学检测服务。该检测通过分析特定基因的mRNA表达量，评估炎症状态、疾病进展或治疗响应，广泛应用于基础研究、临床诊断和药物开发领域。检测的重要性在于其高灵敏度、特异性和定量准确性，能够早期识别炎症标志物，为炎症性疾病（如自身免疫疾病、感染、癌症）的机制研究、生物标志物发现和个性化医疗提供关键数据支持。

检测项目

• IL-1β基因表达水平
• IL-6基因表达水平
• TNF-α基因表达水平
• IL-8基因表达水平
• IL-10基因表达水平
• IFN-γ基因表达水平
• NF-κB基因表达水平
• COX-2基因表达水平
• iNOS基因表达水平
• TLR4基因表达水平
• STAT3基因表达水平
• IL-17基因表达水平
• IL-18基因表达水平
• MCP-1基因表达水平
• CRP基因表达水平
• TGF-β基因表达水平
• IL-12基因表达水平
• IL-23基因表达水平
• IL-33基因表达水平
• CXCL10基因表达水平
• IL-4基因表达水平
• IL-13基因表达水平
• IL-22基因表达水平
• IL-1α基因表达水平
• IL-27基因表达水平
• IL-37基因表达水平
• IL-38基因表达水平
• GM-CSF基因表达水平
• VEGF基因表达水平
• FGF基因表达水平

检测范围

• 白细胞样本
• 外周血单核细胞
• 组织活检样本
• 细胞培养物
• 血清样本
• 血浆样本
• 脑脊液样本
• 滑膜液样本
• 尿液样本
• 唾液样本
• 粪便样本
• 肿瘤组织
• 炎症皮肤样本
• 肠道黏膜样本
• 肝脏组织
• 肺组织
• 心脏组织
• 肾脏组织
• 骨髓样本
• 淋巴结样本
• 胎盘组织
• 脂肪组织
• 神经组织
• 关节液样本
• 精液样本
• 乳汁样本
• 羊水样本
• 泪液样本
• 支气管肺泡灌洗液
• 伤口渗出液

检测方法

• SYBR Green法：使用SYBR Green染料非特异性结合双链DNA，通过荧光强度定量基因表达
• TaqMan探针法：采用荧光标记的探针特异性检测目标基因，提高检测特异性
• 相对定量法：以内参基因（如GAPDH）为参照，计算目标基因的相对表达量
• 绝对定量法：通过标准曲线准确测定基因拷贝数
• RT-qPCR：结合逆转录和qPCR步骤，从RNA模板检测基因表达
• 高分辨率熔解曲线分析：用于验证PCR产物的特异性和突变检测
• 多重qPCR：同时检测多个炎症基因，提率
• 数字PCR：提供绝对定量，适用于低丰度基因检测
• 微滴数字PCR：通过微滴分割提高检测灵敏度和准确性
• 实时荧光监测：在PCR循环中连续监测荧光信号
• 引物优化设计：确保引物特异性和扩增效率
• RNA提取纯化：使用柱式或磁珠法获取高质量RNA
• cDNA合成：通过逆转录酶将RNA转化为cDNA
• 内参基因验证：选择稳定的内参基因进行数据标准化
• 熔解曲线分析：区分特异性产物和非特异性扩增
• 标准曲线构建：用于绝对定量的校准
• 数据分析软件：如CFX Manager处理qPCR数据
• 质量控制步骤：包括无模板对照和阳性对照
• 样本均一化处理：减少样本间变异
• 荧光阈值设定：确定Ct值以量化表达水平

检测仪器

• 实时荧光定量PCR仪
• 微量分光光度计
• 核酸提取仪
• 离心机
• 冰箱或冷冻箱
• 超净工作台
• 涡旋混合器
• 水浴锅
• 微量离心管
• PCR板
• 移液器
• 电泳仪
• 凝胶成像系统
• 生物分析仪
• 恒温孵育箱

问：炎症相关基因表达qPCR测试在临床诊断中的作用是什么？答：该测试可用于检测炎症标志物基因的表达变化，辅助诊断自身免疫疾病、感染或癌症，提供定量数据以评估疾病活动度和治疗响应。问：为什么qPCR测试在炎症基因检测中具有高灵敏度？答：qPCR通过荧光信号实时监测扩增，能够检测低拷贝数的mRNA，结合特异性引物和探针，最小化背景干扰，实现高灵敏检测。问：如何确保炎症相关基因表达qPCR测试的准确性？答：通过严格的质量控制，包括使用内参基因标准化、优化RNA提取流程、设置对照样本以及验证引物特异性，来减少误差并提高结果可靠性。