携带PML-RARA融合基因的急性髓细胞白血病患者人源化小鼠模型

高血压是由多基因、多环境因素及个人不良习惯相互作用而导致的一种慢性复杂疾病，也是危害人类健康的主要疾病之一。盐是高血压的重要环境因素，个体对盐负荷或限盐呈现不同的血压反应，因此存在盐敏感性问题[1]。盐敏感性是高血压、心脑血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和肾功能不全等）发病及致死的一个潜在危险因素 [2]。因此在高血压临床诊治过程中，考虑盐敏感性将有利于对高血压分类、危险分级以及对症治疗。

盐敏感性通常涉及人口、种族、社会因素以及肾功能、激素水平和饮食习惯等[3]。不同种族和人群盐敏感性个体的检出率不同，而且血压的盐敏感性随年龄增长而变化，特别是高血压患者。盐敏感性由Weinberger ADDIN EN.CITE[4]给出定义：静脉滴注2L生理盐水，测量平均动脉压（MAP），次日早晨给予低钠饮食后再测量MAP，两次MAP相差≥10mmHg为盐敏感性，否则为盐耐受性。Yatabe ADDIN EN.CITE ADDIN EN.CITE.DATA [5]定义盐敏感指数（SSI）为低盐和高盐饮食后MAP的差值与低盐饮食MAP的商，若SSI≥5%为盐敏感性。

高盐摄入引起血压升高主要有两方面原因：一方面是肾小管对Na+ 重吸收增加，导致水钠潴留，血浆容量增加，从而血压升高；另一方面是内源性哇巴因物质分泌增多，特异性抑制钠泵，胞内钠离子浓度增加，Na+/Ca2+交换体被激活，细胞内Ca2+ 浓度升高，最终导致血管平滑肌或心肌收缩，引起高血压[6]，可见钠水调节紊乱是盐敏感性高血压发病的主要诱因。有研究表明，胃肠道在维持机体钠水平衡方面具有重要的作用。人体胃肠道每天大约吸收7～9升液体，这一吸收过程主要是由钠依赖的营养物质同向转运体和钠离子转运体共同介导。在基础状态和进食后，小肠内钠吸收主要是通过钠氢交换体（NHE）。在小肠细胞的顶膜上，将肠腔内的钠转运至小肠细胞的电中性钠氢交换体主要有NHE2、NHE3和NHE8，在结肠中主要的电中性钠吸收通道为ENaC。在这些钠吸收通道中NHE3是非常重要的一个钠离子吸收通道。但小肠NHE3的特异性作用还不清楚。DR. Rieg构建了小肠特异NHE3敲除小鼠VillinCre, 并发现该小鼠成年率为0，均为出生后几天死亡，证实肠道中NHE3调节钠水平衡至关重要。

基于肠道NHE3对于机体钠水平衡的调节作用，相关领域已经开展了NHE3抑制剂药物用于高血压治疗的研究，但是NHE3抑制剂都存在明显的副作用，大鼠及人体实验证实NHE3抑制剂药物能够引发中度或重度腹泻。已有测序研究发现NHE3编码基因SLC9A3与先天性钠腹泻（CSD）密切相关，SLC9A3 基因N端钠离子转运结构域发生突变，能够引发NHE3功能缺失，从而诱导CSD发生。提示直接抑制NHE3的药物虽然能够显著降低血压及钠离子重吸收，但无法解决对机体的副作用。因此，我们研究通过其它通路间接抑制NHE3功能来降低血压。最新研究发现，胃泌素不仅能够调节胃酸分泌，还对机体内肾脏钠氢交换体3（NHE3）等离子泵具有重要的调节作用。同时，我们实验室先前的研究结果也表明，胃泌素能够通过抑制NHE3活性参与机体钠水代谢和血压调节，从而改善盐敏感性高血压大鼠的血压状况。由于小肠中存在大量的胃泌素受体，因此我们采用基因工程的方法，敲除小肠道CCKBR基因以抑制胃泌素对NHE3活性的调节作用，从而造成胃肠道钠水平衡的失调，诱导小鼠盐敏感性高血压模型。

1、CCKBR基因敲除及高盐饮食小鼠血压情况

高盐喂养8周后，通过左颈动脉插管法检测小鼠的血压，我们发现，胃泌素受体敲出小鼠的血压相比于野生型小鼠明显升高。给予高盐饮食之后，胃泌素受体敲除小鼠的血压进一步升高。而野生型小鼠的血压没有明显升高。说明小肠CCKBR确实能够参与小鼠血压的调节。

2. CCKBR基因敲除及高盐饮食小鼠尿钠情况

我们使用代谢笼对四组小鼠的尿液进行收集并检测，结果表明与野生型小鼠相比，胃泌素受体敲除小鼠的尿钠水平降低。和给予高盐饮食的野生型小鼠相比，给予高盐饮食的胃泌素受体敲除小鼠的尿钠水平也显著降低。说明CCKBR基因敲除及高盐饮食能够诱导小鼠钠水代谢异常，进而诱发高血压。

3. CCKBR基因敲除及高盐饮食小鼠小肠刷状缘膜上NHE3调节蛋白的表达

为了进一步确定胃泌素受体敲除后，小肠绒毛刷状缘膜上NHE3调节蛋白的作用，我们提取了CCKBR+/+小鼠和CCKBR-/-小鼠对照组和高盐组小肠的膜蛋白，我们发现对照组CCKBR-/-小鼠和对照组CCKBR+/+小鼠相比，NHE3、NHERF1、NHERF2、NHERF3、ezrin和IRBIT的表达升高，高盐饮食之后，CCKBR-/-小鼠小肠膜蛋白中NHE3、NHERF1、NHERF2、NHERF3、ezrin和IRBIT的表达进一步升高。这说明胃泌素受体缺失之后，胃泌素对NHE3调节蛋白的抑制作用消失，进一步诱发钠水平衡失调以及高血压的发生发展。

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。