乳腺癌细胞4TO7荧光素酶标记小鼠模型

女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌（breast cancer）是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。

早期乳腺癌往往不具备典型的症状和体征，不易引起重视，常通过体检或乳腺癌筛查发现。乳腺肿块、乳头溢液、皮肤改变、乳头、乳晕异常、腋窝淋巴结肿等为乳腺癌的典型体征。

4TO7小鼠乳腺癌细胞，和4T1，66c14细胞同来源于一BALB／cfC3H小鼠自发乳腺癌细胞株，但4TO7细胞具有高致瘤性，但自发转移率低。

细胞接种动物为BALB/c小鼠，BALB/c 是白色变种实验室用鼠，起源于小家鼠Mus musculus，广泛用于免疫学、生理学的动物实验。

1. 细胞：小鼠乳腺癌细胞4TO7来自ATCC；载体：构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（thecytomegalovirus，CMV)早期增强子（earlyenhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chickenbeta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。

2. 细胞稳定转染：采用脂质体2000转染小鼠乳腺癌细胞4TO7细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×106／mL。取0.1 mL细胞悬液接种于BALB／c小鼠（5周龄，体重15-18 g）右侧第二对乳腺脂肪垫内。1×106个细胞/只，接种后每隔一周，采用活体荧光影像系统摄像动态观察肿瘤的生长和转移情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5 mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放人活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4．0软件进行分析。

本模型将luc基因转染到小鼠乳腺癌细胞4TO7中得到了高表达luciferase细胞株。将luc标记的小鼠乳腺癌细胞4TO7细胞经原位接种至BALB／C小鼠，用活体荧光成像系统连续观察28天，每7天观察一次。第7天能够发现成瘤，并且肿瘤的体积与发光强度随时间变大、增强。

此模型与常规模型相比具有以下优点：（1）无创伤性；（2）可多次重复在不同时间点检测；（3）快速扫描成像(时间<5 min)；（4）可以使实验动物整体成像；（5）同一实验动物体内获得全部时间点的整体数据。

该小动物模型饲养在清洁级动物中，微生物处于监控状态，动物房有相应的保护措施，小鼠不会出现逃逸，不会对外界环境造成影响。

66c14与4T1和4T07细胞模型比较。将Luc标记的4T1、66c14、4T07细胞对BALB／c小鼠乳腺原位接种4T1细胞乳腺原位移植瘤最大，66c14细胞瘤体次之，4T07细胞瘤体最小；接种后35 d，三株细胞乳腺原位移植瘤大小较一致。4T1和66c14原位移植瘤均可发生转移，其中4T1细胞较66c14细胞转移最为严重，而4T07细胞未见转移。