心脏组织特异性过表达CNN1转基因小鼠模型

扩张型心肌病以心腔扩张、心肌收缩功能受损为主要特征，其为原发性心肌病的主要类型，临床表现包括进行性心力衰竭，心律失常，气短及水肿。扩张型心肌病是除冠心病和高血压以外导致心力衰竭的主要病因之一，至今，除行心脏移植外，扩张型心肌病仍无特异有效的治疗方法，其主要是对症治疗，但随病情进一步发展，心衰加重最终导致死亡，其病症出现后5年存活率约为40%。

扩增并经测序比对正确的CNN1片段插入α-MHC启动子下游构建心脏特异表达CNN1表达载体。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。PCR法鉴定小鼠基因型，Western Blot分析CNN1蛋白的表达情况（图1）。

将CNN1基因片段插入α-MHC心脏组织特异性启动子下游构建转基因表达载体(A), Western Blot分析CNN1蛋白表达(B)及灰度扫描定量分析(C,n=3, **P <0.01 versus NTG).

1. Spss16.0软件Kaplan-Meier curves分析显示，至8月龄时cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型的存活率为81.4%（图2, n=59, P < 0.001），CNN1的表达使得DTG双转基因小鼠的存活率提高了14%。

至8月龄时,对照小鼠（n=67）及CNN1转基因小鼠（n=34）无死亡发生, 经Spss16.0软件Kaplan-Meier curves分析, CNN1的表达使得cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠（n=59, ***P < 0.001）的存活率提高了14%（DTGmice, n=25, ##P < 0.01）.

2. CNN1的表达可显著改善遗传性扩张型心肌病cTnTR141W转基因小鼠及阿霉素诱导的扩张型心肌病模型小鼠心脏结构形态及心肌收缩功能。

3. CNN1的表达可显著改善遗传性扩张型心肌病cTnTR141W转基因小鼠心脏整体结构形态及显微及超微结构改变。

6月龄时NTG, CNN1, cTnTR141W及DTG四组小鼠心脏切片H&E染色整体(A)及高倍(B)截图, 心脏切片Masson染色(C), Col3a1表达(D)及灰度扫描定量分析(E, n=3, *P <0.05,**P <0.01 versus NTG, ##P <0.01 versus DTG), 及心肌组织投射电镜分析(F).

4. CNN1的表达可显著激活遗传性扩张型心肌病cTnTR141W转基因小鼠心肌组织中εPKC/ERK/mTOR信号通路。

6月龄时NTG, CNN1, cTnTR141W及DTG四组小鼠心脏组织中CNN1,εPKC, ERK及mTOR的表达(A)及灰度扫描定量分析(B-D, n=3, *P <0.05, **P <0.01, **P <0.01 versus NTG; #P <0.05, ##P <0.01 versus DTG).

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。