高表达M-CSF选择性剪接体MLL-AF9诱导小鼠髓细胞白血病模型

急性髓细胞性白血病（Acute myeloid leukemia，AML）是髓系造血干/祖细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等。

SPF级6-8周龄鼠，C57BL/6J小鼠（CD45.2）， B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠（B6.SJL，CD45.1）。

1. 病毒准备

细胞：293T

表达载体：MSCV- MLL-AF9 -IRES-GFP，MSCV- M-CSF -IRES-BFP。

2. 实验动物

可使用SPF级别的6-8周龄鼠， C57BL/6J小鼠（CD45.2）， B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠（B6.SJL，CD45.1）。

3. 细胞准备：

取B6.SJL小鼠的骨髓细胞，利用C-kit+磁珠，富集C-kit+造血干祖细胞

4. 病毒感染

富集的小鼠C-kit+造血干祖细胞，体外感染表达MSCV- MLL-AF9-IRES-GFP的逆转录病毒，感染后培养48h。

5. 细胞回输

感染后的C-kit+造血干祖细胞利用流式细胞仪分选出GFP+的细胞，通过尾静脉注射到致死剂量照射的C57BL/6J小鼠体内，每周检测GFP+细胞的比例。

6. 病毒二次感染及回输

当检测到小鼠外周血GFP+细胞的比例超过50%，处死小鼠，取小鼠骨髓细胞，

1. 模型分析指标

（1） 症状观察

细胞回输后小鼠症状表现为：竖毛、弓背。

（2） 流式检测

在细胞回输后的一周后，每周检测外周血GFP+ BFP+细胞的比例，有出现GFP+ BFP+细胞，即为模型成功。

2. 动物症状观察

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。

3. 细胞表型

流式检测结果显示，细胞免疫表型为CD3-B220-Gr-1+CD11b+

动物症状观察：

表现为体重减轻、弓背竖毛，在回输后的一个月后死亡。