SARS-CoV PUMC01鼻腔途径感染恒河猴模型

2002年在中国广东爆发的严重急性呼吸综合征（SevereAcute Respiratory Syndrome，SARS）波及全世界34个国家。2003年4月16日，世界卫生组织根据包括中国内地和香港地区，加拿大、美国在内的11个国家和地区的13个实验室通力合作研究的结果，宣布重症急性呼吸综合征的病因是一种新型的冠状病毒，称为SARS冠状病毒。

SARS早期(1~3d），不断释放到血液中SARS-CoV，引起病毒血症。临床上，表现为发热、畏寒、头痛、肌痛等症状。从SARS疾病的起始，淋巴细胞就受到了SARS-CoV的侵袭，因此，患者的外周血淋巴细胞数目减少是诊断SARS的重要指标。SARS轻症患外周血CD3+、CD4+、 CD8+数恢复正常；重症患者呈持续下降。所有死亡SARS患者尸解标本中，脾、淋巴结、扁桃体和肠道的淋巴组织萎缩，淋巴细胞大量减少，呈现出耗竭状态。在数周到2个月时间内，SARS-CoV对重症SARS患者免疫器官的损伤程度达到了艾滋病晚期水平。由于患者发生免疫缺陷，因此，发生机会性感染的发病率在本组病例中高达50%。

陷窝蛋白-1在呼吸道上皮细胞内高表达，SARS-CoV感染造成多组织脏器损伤，以肺损伤最突出。初始在肺组织中复制增值的SARS-CoV、经血重新进入肺的SARS-CoV和渗出到肺组织中的淋巴细胞、单核细胞本身携带的SARS-CoV在肺内聚积、增殖，不断加重肺损伤。这种损伤具有连续性、弥漫性、严重性的特点，导致广泛性肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤，大量蛋白性液体、纤维蛋白、炎症细胞渗出和炎症介质的过量释放，造成了肺内毛细血管的通透性显著增加，最后引起弥漫性肺泡损伤（diffuse alveolardamage, DAD）发生。此时，疾病陷入进展期（4~9d）。在进展期，与肺部的病理改变相对应，患者出现咳嗽、气促、胸闷和呼吸困难等呼吸系统症状。X线检查，肺内早期病变是两肺下野出现斑片状阴影。病情继续发展，到达极期（10~14d），患者出现严重呼吸困难，甚至发生急性呼吸窘迫综合征。X线下，进展期和极期病变迅速发展为两肺广泛病变，呈现弥漫分布斑片状渗出阴影，伴有磨玻璃阴影、边界模糊结节状实变影。

实验用恒河猴在实验室内传代三次以上，遗传背景明确，年龄为1-3岁。按照国家微生物和寄生虫SPF等级通过检测，并证明抗SARS抗体阴性。

恒河猴在生物安全三级（BSL-3）实验室内饲养，并按国家动物生物安全标准操作规程进行操作。

SARS-CoV病毒株为PUMC01（Sino-1, GenBank Acc. #：AY350750），分离自一个死于北京协和医院的典型的SARS患者（PUMCH）。该病毒株通过RT-PCR、序列分析和电子显微镜方法鉴定为SARS-CoV。通过鼻腔喷雾方法感染动物。

感染后，每天检测肛温、血液学指标和胸部放射线。每日观察咳嗽、鼻腔分泌物、呕吐、皮疹、呼吸衰竭、呼吸困难、腹泻和食欲降低等情况。克他命（Ketamine）安乐死后取样检测。

5.1 恒河猴感染后临床变化

恒河猴感染后出现体温升高，最高40.2℃，随后降至38℃左右。部分动物出现呼吸困难，摄食减少，胸腹部皮肤出现皮疹。未见咳嗽、流涕、呕吐、腹泻等临床表现。胸部放射线照射没有发现肺脏异常，白细胞计数无明显异常。对照组组动物均未出现体温升高、咳嗽、呕吐、皮疹、腹泻、窒息和呼吸困难。X线检测未发现肺部异常，WBC计数正常。

5.2 恒河猴感染后体内抗SARS-CoV抗体和SARS-CoV复制情况

感染病毒前，恒河猴中血清抗SARS-CoV特异性抗体阴性。测抗SARS-CoV特异性IgG抗体，第15－30天达高峰，最高达到1:320，同时也可检测到中和抗体的产生（表2）。对照组抗未检测到抗SARS-CoV IgG抗体。