小鼠肺腺癌LA795绿色荧光标记细胞BTT739小鼠模型

肺腺癌（lungadenocarcinoma）是肺癌的一种，属于非小细胞癌。不同于鳞状细胞肺癌中，肺腺癌较容易发生于女性及不抽烟者。起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺。发病率比鳞癌和未分化癌低，发病年龄较小，女性相对多见。多数腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌。早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部 X 线检查时被发现。表现为圆形或椭圆形肿块，一般生长较慢，但有时早期即发生血行转移。淋巴转移则发生较晚。腺癌是腺上皮恶性肿瘤，可以有腺泡、乳头、细支气管肺泡或实性生长方式。它常伴有黏液产生，检测黏液需要特殊的染色，尤其在分化差的肿瘤。黏液的检测有时能够鉴别实性腺癌与其他形态表现一样的大细胞癌。

腺癌大约占肺原发肿瘤的40%。较容易发生于女性及不抽烟者。肺癌在早期并没有什么特殊症状，仅为一般呼吸系统疾病所共有的症状，如咳嗽、痰血、低热、胸痛、气闷等，很容易忽略。

早期肺外表现有骨关节症状：此类症状较为多见。由于肺癌细胞可产生某些特殊的内分泌激素（异源性激素）、抗原和酶，这些物质运转作用于骨关节部位，而致骨关节肿胀疼痛，常累及胫、腓、尺、桡等骨及关节，指趾末端往往膨大呈杵状指，x线摄片检查可见骨膜增生。肩背痛：肺外围型肺癌常向后上发展，侵蚀胸膜，累及肋骨和胸壁组织，从而引起肩背痛。这类患者很少有呼吸道症状。 声音嘶哑：肺癌转移灶压迫喉神经，可使声带单板机痹而致声音嘶哑。由于肺癌的转移灶在早期即可出现，并县城转移灶有时可长得比原发灶快，因此转移灶的临床表现可先于原发灶出现。

肺癌晚期症状会因病人体质不一样而有一定的差别，肺癌晚期时病情比较严重，需要及时对症治疗。疼痛是肺癌晚期患者经常表现出来的症状，大多数已发生胸内区域性播散的肺癌患者均有胸痛的症状。声音嘶哑是肺癌晚期症状之一。控制左侧发音功能的喉返神经由颈部下行至胸部，绕过心脏的大血管返行向上至喉，从而支配发音器官的左侧。因此，若肿瘤侵及纵隔左侧，使喉返神经受到压迫，声嘶便产生了，但却无咽痛及上呼吸道感染的其它症状。 面、颈部水肿也是肺癌晚期症状中比较常见的，若肿瘤侵及纵隔右侧压迫上腔静脉，最初会使颈静脉因回流不畅而怒张，最后还会导致面、颈部水肿，这需要得以及时诊断和处理。气促、胸腔积液也是肺癌晚期症状中的表现。

肺癌的病因至今尚不完全明确，大量医学资料表明肺癌的危险因子包含吸烟（包括二手烟）、石绵、氡、砷、电离辐射、卤素烯类、多环性芳香化合物、镍等。具体如下：（1）吸烟：长期吸烟可引致支气管粘膜上皮细胞增生磷状上皮生诱发鳞状上皮癌或未分化小细胞癌无吸烟嗜好者虽然也可患肺癌但腺癌较为常见，纸烟燃烧时释放致癌物质；（2）大气污染：（3）职业因素：长期接触铀镭等放射性物质及其衍化物致癌性碳氢化合物砷、铬、镍、铜、锡、铁、煤焦油、沥青、石油、石棉、芥子气等物质均可诱发肺癌主要是鳞癌和未分化小细胞癌；（4）肺部慢性疾病：如肺结核、矽肺、尘肺等可与肺癌并存，这些病例癌肿的发病率高于正常人，此外肺支气管慢性炎症以及肺纤维疤痕病变在愈合过程中可能引起鳞状上皮化生或增生在此基础上部分病例可发展成为癌肿；（5）人体内在因素：如家族遗传以及免疫机能降低代谢活动内分泌功能失调等。

小鼠肺腺癌LA795细胞系是上皮样贴壁细胞，1979年5月建系；取自T739近交系小鼠自发乳头型肺腺癌。原代培养建系，24小时细胞开始生长，首次传代45天,上皮样圆形细胞，贴壁生长 ，T739、615、KM小鼠皮下移植成功；T739小鼠肺100%转移。

T739小鼠，鼠科（Family Muridae）,小鼠属（Musmusculus），是一种土黄色近交系小鼠，是615近交系小鼠与昆明小鼠杂交后兄妹交配培育成功，经皮肤移植、生化电泳方法检测基因位点、毛色基因等指标监测符合近交小鼠标准，并已经通过鉴定。小鼠染色体C带大小存在多态性，亦即各近交系小鼠的某些对同一号染色体C带大小不同，可作为鉴别近交系小鼠以及遗传监测的一种细胞遗传学指标。

一、模型制作方法

模型制作采用BTT739小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。

1 细胞培养：LA795细胞为本实验室冻存

2 构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP

3 细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染LA795细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。

稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP。细胞形态和未转染细胞无明显区别。

4 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行小鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

应用小动物活体荧光成像系统可监测到绿色荧光蛋白在小鼠皮下的稳定表达，从第1周至第4周，随着肿瘤移植时间的增加，表达绿色荧光蛋白的面积逐渐增大（图1）。

该小动物模型饲养在清洁级动物中，微生物处于监控状态，动物房有相应的保护措施，小鼠不会出现逃逸，不会对外界环境造成影响。