红色荧光标记人胰腺癌细胞capan-2皮下接种裸鼠模型

人胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1%，是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌恶性度高，病程短，一般出现症状时已属晚期，并很快发生转移，侵犯邻近脏器。胰头癌与胰体尾癌的转移途径不完全一致，胰头部癌常侵犯到胆总管、十二指肠、胃及腹腔动脉，其淋巴转移途径主要是经肠系膜上动脉周围淋巴结向五动脉周围淋巴结转移。胰体、尾部癌常沿神经鞘向腹腔神经丛及脊髓方向转移，或沿淋巴管转移至胰上及肝门淋巴结等处。本病发病率男性高于女性，男女之比为1.5～2:1，男性患者远较绝经前的妇女多见，绝经后妇女的发病率与男性相仿。

2.1腹痛 作为胰腺癌的典型症状—腹痛，其还是与其他疾病表现出的腹痛有所不同的。65%~80%的胰腺癌病人有腹痛，与饮食无关，起初多数较轻，呈持续性疼痛逐渐加重，常于夜间更为严重。而且平卧位和坐位可使疼痛加重，仰卧位或脊柱伸展时也会使得疼痛明显。

2.2消瘦 胰腺癌和其他癌瘤不同，常在初期即有消瘦、乏力。

2.3 症状性糖尿病 少数病人起病的最初表现为糖尿病的症状，即在胰腺癌的主要症状如腹痛、黄疸等出现以前，先患糖尿病，以至伴随的消瘦和体重下降被误为是糖尿病的表现，而不去考虑胰腺癌。

2.4 血栓性静脉炎 晚期胰腺癌患者出现游走性血栓性静脉炎或动脉血栓形成。

2.5精神症状 部分胰腺癌患者可表现焦虑、急躁、抑郁、个性改变等精神症状。

2.6腹腔积液 一般出现在胰腺癌的晚期，多为癌的腹膜浸润、扩散所致。腹腔积液可能为血性或浆液性，晚期恶病质的低蛋白血症也可引起腹腔积液。

2.7其他 此外，患者常诉发热、明显乏力。可有高热甚至有寒战等类似胆管炎的症状，故易与胆石症、胆管炎相混淆。当然有胆道梗阻合并感染时，亦可有寒战、高热。部分患者尚可有小关节红、肿、痛、热、关节周围皮下脂肪坏死及原因不明的睾丸痛等。锁骨上、腋下或腹股沟淋巴结也可因胰腺癌转移而肿大发硬。

人胰腺癌细胞Capan-2源自一位56岁的男性白人，组织培养，呈现上皮样细胞特征；接种裸鼠后，组织病理学上类似于原发癌，肿瘤呈现高分化的腺癌样生长。人胰腺癌细胞株Capan-2取自胰腺导管腺癌，产生高水平粘蛋白MUC-1的 mRNA, 低水平粘蛋白MUC-2的 mRNA ,但是不表达粘蛋白 MUC-3 基因。利用脂质体2000将红色荧光标记表达载体chicken β-actin-RFP-NEO转染Capan-2细胞,通过G418抗生素筛选到一株稳定高表达红色荧光蛋白(RFP)的单克隆人胰腺癌细胞Capan-2，命名为Capan-2-DsRed, 该单克隆细胞在荧光显微镜下呈强荧光，荧光较均匀的分布于整个细胞内,传代数次后仍能稳定高水平表达RFP , 细胞形态和未转染细胞无明显区别(图1)。

图1 红色荧光表达载体的构建和Capan-2稳定高表达RFP的单克隆细胞株（200×）

将对数生长期的Capan-2-DsRed细胞皮下接种于2只BALB/c裸鼠，接种细胞数量为1×106/只, 采用活体荧光影像系统摄像动态观察。模型制作采用的BALB/c裸鼠，鼠龄5周，体重15—18 g，在无特定病原体(specific—pathogenfree，SPF)的饲养间饲养。

分别在接种后的7、14、21、28、35d观察裸鼠皮下肿瘤的生长情况。在接种的第7天就可以观察到肿瘤荧光，通过肿瘤组织发出的荧光的光子数确定肿瘤的大小，随着观察天数的增加，肿瘤的体积和发光强度增加，且具有很好的相关性(图1)。

图1皮下接种Capan-2-DsRed肿瘤生长影像分析

该小动物模型饲养在清洁级动物中，微生物处于监控状态，动物房有相应的保护措施，小鼠不会出现逃逸，不会对外界环境造成影响。